[发明专利]一种从螺旋藻中制备丁香酸的方法

摘要

本发明公开了一种从螺旋藻中制备丁香酸的方法，包括以下步骤：步骤一、用乙醚浸提螺旋藻粗提物；步骤二、粗提物用葡聚糖凝胶柱进行第一次分离纯化；步骤三、粗提物用反相硅胶柱进行第二次分离；步骤四、粗提物用葡聚糖凝胶柱进行第三次分离；步骤五、粗提物用反相硅胶柱进行第四次分离；步骤六、粗提物用正相硅胶柱进行第五次分离，得化合物A；步骤七、结构鉴定化合物A为丁香酸，即制得丁香酸。本发明首次从螺旋藻中分离出了丁香酸，丁香酸作为螺旋藻的活性成分，对于螺旋藻的二次开发意义重大。

主权项

1.一种从螺旋藻中制备丁香酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、称取50g螺旋藻粉置于1L的三角瓶中，加入500mL无水乙醚摇匀，浸提4h，抽滤，收集滤液；再向沉淀中加入500mL无水乙醚进行第二次浸提4h，抽滤，收集滤液；如此浸提3次，合并滤液，真空减压浓缩蒸干，得粗提物；步骤二、将粗提物用甲醇溶解后，上Sephadex LH‑20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，控制流速为8 s/drop，每0.5h收集一管，共收集216管，每管组分用薄层层析TLC分析，合并含有相同物质的组分；再将合并组分用甲醇稀释至浓度为5mg/mL，用DPPH法测定合并组分的抗氧化活性，选用抗氧化活性最高的合并组分标记为T1，蒸干，4ºC贮藏备用；步骤三、组分T1用适量甲醇溶解后，上C18反相硅胶柱，采用梯度洗脱的方式洗脱样品，梯度设置为95%水：5%甲醇、75%水：25%甲醇、50%水：50%甲醇、25%水：75%甲醇、100%甲醇；控制流速为8mL/min，前四个梯度中，每个梯度收集5管，最后一个梯度收集16管，每管收集7min，共收集36管；每管组分用薄层层析TLC分析，合并含有相同物质的组分；选择量较大的合并组分，标记为T2，用甲醇稀释至浓度为5mg/mL，用DPPH法测定组分T2的抗氧化活性，蒸干，4ºC贮藏备用；步骤四、组分T2用适量甲醇溶解后，上Sephadex LH‑20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，控制流速为13 s/drop，每0.5h收集一管，共收集40管，每管组分用薄层层析TLC分析，合并含有相同物质的组分，标记为T3；再将组分T3用甲醇稀释至浓度为5mg/mL，用DPPH法测定组分T3的抗氧化活性，蒸干，4ºC贮藏备用；步骤五、组分T3加适量甲醇溶解后，上C18反相硅胶柱，采用梯度洗脱的方式洗脱样品，梯度设置为25%水：75%甲醇、15%水：85%甲醇、5%水：95%甲醇、100%甲醇；控制流速为8mL/min，前三个梯度中，每个梯度收集5管，最后一个梯度收集8管，每管收集7min，共收集23管；每管组分用薄层层析TLC分析，合并含有相同物质的组分，标记为T4，组分T4用甲醇稀释至浓度为5mg/mL，用DPPH法测定组分T4的抗氧化活性，蒸干，4ºC贮藏备用；步骤六、组分T4加适量甲醇溶解后，过正相硅胶柱分离；用硅胶粉拌样，硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后，采用梯度洗脱的方式洗脱样品，梯度设置为石油醚和丙酮的体积比为300：1、250：1、200：1、150%：1、80：1、50：1、20：1、10：1、5：1；首先用石油醚：丙酮为300：1的洗脱液洗脱，共用洗脱液300mL，每9mL收集一管，同时用TLC追踪目标点，若没有发现目标点，则换下一个洗脱梯度；目标点在石油醚：丙酮为10:1的洗脱液被洗脱下来，继续用这个梯度的洗脱剂洗脱，用TLC显色判断洗脱终点，合并这个梯度的第3至第8管，进行TLC分析，经过真空减压浓缩，得化合物A；步骤七、将化合物A装入核磁管中，蒸干溶剂，加入氘代试剂，以TMS作为内标，使用400MH核磁共振仪测定化合物A的核磁谱，经过对核磁谱的数据解析，得知化合物A为丁香酸，即制得丁香酸。