[发明专利]一种细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法有效
| 申请号： | 201811394237.7 | 申请日： | 2018-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN109402179B | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 李秀敏;王立东;李亚杰;梁银明;张黎琛;周孝峰;夏冬雪;王伟隆;常廷民;庞丹;侯婧晗;王素杰;张爱佳;靳艳;赵学科 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/85;C12N9/22;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，属于分子生物学技术领域。本发明中的细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，利用流式细胞分选仪，将200个带有载体荧光标签的阳性细胞群分选到96孔板的两个孔中，培养0h后进行片段分析（Fragment analysis，FA），可检测到CRISPR‑Cas9打靶该功能基因后目的基因座发生有效编辑的克隆；培养7天后，再次进行片段分析，此时片段分析峰图可根据不同细胞的增殖特性发生变化，其中增殖速度快的细胞出峰显著，而增殖速度慢的细胞群则出峰不明显，甚至不出峰；由此可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 细胞系 食管癌 功能 基因 增殖 表型 快速 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：1）通过CRISPR Cas9基因编辑技术获得食管癌功能基因敲除细胞；2）使用流式细胞分选仪将所述食管癌功能基因敲除细胞中的阳性筛选标记细胞分选到细胞培养容器中，得到阳性筛选标记细胞群；3）将所述阳性筛选标记细胞群直接提取DNA，然后针对基因敲除段设计检测引物进行PCR扩增，根据PCR扩增结果选择所述食管癌功能基因发生基因编辑并导致基因缺失的细胞群进行荧光PCR片段分析，获得第一峰图；同时将所述阳性筛选标记细胞群培养后提取DNA进行荧光PCR片段分析，获得第二峰图；4）通过第一峰图和第二峰图中的峰值对比判断该食管癌功能基因敲除后的增殖表型。
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