[发明专利]一种拟南芥叶肉细胞原生质体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201811394334.6 | 申请日： | 2018-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN109355246B | 公开（公告）日： | 2022-02-11 |
| 发明（设计）人： | 史勇;金维环;陈彦惠;任真真;刘姣姣;王林会 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N15/82;C12N5/10 |
| 代理公司： | 郑州中原专利事务所有限公司 41109 | 代理人： | 赵磊;王文文 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种拟南芥叶肉细胞原生质体的制备方法，具体步骤如下：剪取3‑5周的拟南芥叶片用无弹性的纸质胶带或布质胶带固定叶片的上表皮和下表皮；轻轻撕掉叶片下表皮的无弹性的纸质胶带或布质胶带，将剪好的叶片放入含有酶解液的培养皿中；将放有叶片的培养皿置于摇床中培养30‑90min或者直至绝大部分或全部原生质体从叶片上脱离下来为止；将含有原生质体的酶解液转移到圆底离心管中，离心收集原生质体；用预冷的W5溶液清洗原生质体，用W5溶液重悬原生质体并在冰上放置最少30分钟。本发明将原生质体置于黑暗条件下培养，有效解决了光照培养引起的细胞死亡和凝聚现象，能极大的提高转化效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 拟南芥 叶肉 细胞 原生 质体 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种拟南芥叶肉细胞原生质体的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）剪取3‑5周的拟南芥叶片用无弹性的纸质胶带或布质胶带固定叶片的上表皮和下表皮；（2）轻轻撕掉叶片下表皮的无弹性的纸质胶带或布质胶带，用剪刀减掉下表皮未被撕掉的叶片部分和不含叶片的胶带部分，将剪好的叶片放入含有酶解液的培养皿中；（3）将放有叶片的培养皿置于35‑45转每分钟的摇床中培养30‑90min或者直至绝大部分或全部原生质体从叶片上脱离下来为止；（4）将含有原生质体的酶解液转移到圆底离心管中，90‑110 xg离心2‑4分钟收集原生质体；用预冷的W5溶液清洗原生质体2次，用W5溶液重悬原生质体并在冰上放置最少30分钟。
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