[发明专利]一种常山的组织培养快繁方法

摘要

本发明公开了一种常山的组织培养快繁方法，常山为虎耳草科植物，产于湖南、广西、贵州、四川、江西。目前，常山种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了常山离体再植株，建立常山组织培养快速繁殖技术体系，对于进行优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进的产业化发展具有重要意义。

主权项

1.一种常山的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：步骤1，诱导不定芽：选取常山当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒30秒种后，用无菌水冲洗10次后置于0.1%的升汞溶液中消毒36分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+0.6～0.9mg/LTDZ+2.0～3.0mg/L 6‑BA+0.6～0.8mg/LNAA+31～40g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；步骤2，继代培养：将步骤1获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照20小时，光照强度为2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，36天转接一次；增殖培养基为：MS+2.1～3.1mg/L 6‑BA+0.6～0.9mg/LNAA+31～40g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；步骤3，生根培养：将步骤2继代培养长至10cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照20小时，光照强度为3500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+0.6～1.0mg/LIBA+2.1～3.0mg/L GGR+31～41g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；步骤4，炼苗移栽：将长至12cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗12天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（6：2：1）混合成的基质中并定植于大田中。