[发明专利]一种望江南组织培养再生体系构建方法

摘要

本发明公开了一种望江南组织培养再生体系构建方法，通过无性快繁技术获得株性稳定望江南种苗的技术方法。本发明以望江南未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了望江南组织培养再生体系，既解决望江南优质种苗缺乏的问题，又可为今后开展望江南遗传转化工作奠定基础。

主权项

1.一种望江南组织培养再生体系构建方法，其特征在于包括以下步骤：步骤（1），种子消毒：选择未成熟果子，去叶后于洗衣粉水浸泡34min，刷净后自来水冲洗3h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒35s后用无菌水洗10次，再用0.1%升汞溶液消毒29min，用无菌水冲洗7次后备用； 步骤（2），胚愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后未成熟种胚切成0.6cm×0.6cm×0.6cm接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养46天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3300lx，直至诱导形成胚性愈伤组织；诱导培养基为：ER+6‑BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+GA35 mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L，pH为5.7；步骤（3），分化培养：将步骤（2）培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2800lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽；分化培养基为：ER+6‑BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖19g/L+琼脂5.5g/L，pH为5.7；步骤（4），生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为5.5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照17小时，光照强度为1800lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+IBA0.2mg/L+GGR1.0mg/L+KT1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L，pH为5.7；步骤（5），炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约9cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。