[发明专利]一种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型方法及试剂

摘要

快速、准确的一种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型方法，包括步骤：(1)制备基因分型样本的人基因组DNA；(2)提供扩增引物，用聚合酶链反应同步扩增所述基因组DNA中5个血型系统12个抗原对应的基因序列；(3)将步骤(2)得到的扩增产物作双酶切纯化；(4)提供测序引物，将步骤(3)所得纯化产物分别作测序PCR反应；(5)将步骤(4)所得测序反应产物作醋酸钠‑乙醇沉淀法纯化，毛细管电泳测序；(6)将步骤(5)所得序列经软件分析，确定其血型抗原基因型；所述扩增引物和测序引物为序列号1‑14的，所述方法所用试剂具有所述扩增引物和测序引物。本发明用于种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型。

主权项

1.一种同步检测5个红细胞血型系统12个抗原的基因分型方法，其特征在于：所述方法对5个人类红细胞血型系统的12个抗原进行同步基因分型，所述方法包括以下步骤：(1)制备基因分型样本的人基因组DNA；(2)提供扩增引物，用聚合酶链反应同步扩增所述基因组DNA中5个血型系统12个抗原对应的基因序列；(3)将步骤(2)得到的扩增产物进行双酶切纯化；(4)提供测序引物，将步骤(3)得到的纯化产物分别进行测序PCR反应；(5)将步骤(4)得到的测序反应产物进行醋酸钠‑乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；(6)将步骤(5)获得的序列通过软件分析，确定其血型抗原基因型；步骤(2)中的扩增引物与步骤(4)中相应的测序引物相同，这些引物为：(1)Kell血型系统K、k抗原编码基因的扩增和测序引物：KEL‑F:5’‑GAG GGA GAT GGA GAT GGA AA‑3’KEL‑R:5’‑GAC TGG TGT GTG TGG AGA GG‑3’(2)Duffy血型系统Fya、Fyb抗原编码基因的扩增和测序引物：FY‑F:5’‑TCC CCC TCA ACT GAG AAC TC‑3’FY‑R:5’‑AAG GCT GAG CCA TAC CAG AC‑3’(3)Duffy血型系统Fy(a‑b‑)无效表型(Fya和Fyb抗原均阴性)编码基因的扩增和测序引物：FYN‑F:5’‑CAA GGC CAG TGA CCC CCA TA‑3’FYN‑R:5’‑CAT GGC ACC GTT TGG TTC AG‑3’(4)Kidd血型系统Jka、Jkb抗原编码基因的扩增和测序引物：JK‑F:5’‑CTT TCA ATC CCA CCC TCA GT‑3’JK‑R:5’‑CTC AAT AGG CTC CTG CCT TC‑3’(5)Dombrock血型系统Doa、Dob抗原编码基因的扩增和测序引物：DO1‑F:5’‑ACA GGG GCC ACC ATT CGA TT‑3’DO1‑R:5’‑TGT GCT CAG GTT CCC AGT TG‑3’(6)Dombrock血型系统Hy、Joa抗原编码基因的扩增和测序引物：DO2‑F:5’‑ATC GAC TTC GAC TTC GCA CC‑3’DO2‑R:5’‑ACG TTC ATA CTG CTG TGG AG‑3’(7)Colton血型系统Coa、Cob抗原编码基因的扩增和测序引物：CO‑F:5’‑AAG CTC TTC TGG AGG GCA GT‑3’CO‑R:5’‑GAC ACC TTC ACG TTG TCC TG‑3’。