[发明专利]一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法

摘要

一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法本发明涉及天然产物含量测定领域，具体为一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，本发明采用冷冻干燥的方法收集黑莓种子，采用超声法对天然维生素E的提取条件进行优化，并采用高效液相色谱法，以α‑生育酚，γ‑生育酚，δ‑生育酚作为标准品测定黑莓种子样本中天然维生素E的含量，为植物品质标准提供参考，本发明步骤简单，经济实用，适于推广。

主权项

1.一种检测黑莓种子中天然维生素E含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：（1）称取：按重量g计，取种子的冻干粉0.5g，精密称定；（2）超声提取：加入30mL正己烷提取剂，30℃超声提取40min，将上清液离心收集；（3）重复步骤（2）1~2次；（4）浓缩：将上清液收集，在旋转蒸发器中，浓缩至干，去除正己烷，即得样品提取物；（5）溶解：将样品提取物加入50mL乙腈溶解，准备测定；（6）测定：高效液相色谱测定，采用C18色谱柱：ODS柱（250×4.6 mm, 5 μm），柱温控制在25℃，流动相：甲醇：水=（98:2v/v），等度洗脱15min，流速控制在1mL/min，二级管阵列检测器检查波长300nm，进样量为20µL；（7）标准品溶液的制备：选取Simga公司的维生素E作为标准品，制成浓度为：2.5, 5, 10, 20, 40, 80μg/ml的标准品溶液，主要以α‑生育酚，β‑生育酚，γ‑生育酚，δ‑生育酚标准样品的保留时间作为定性依据，各所测样品中与标样保留时间一致的色谱峰被认为是α‑生育酚，β‑生育酚，γ‑生育酚，δ‑生育酚，其中β‑生育酚与 γ‑生育酚保留时间相同，由于β‑生育酚在常温下极其不稳定，所以在实验操作中以 γ‑生育酚代替(β+γ)‑生育酚测定；（8）高效液相色谱测定法：不同浓度的标准品溶液分别以20进样，测定300nm波长下维生素E的峰面积，以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准品为横坐标分别做标准曲线，得到300nm波长下维生素E的峰面积，根据各自的标准曲线计算样品提取液中维生素E的含量，并结合黑莓种子样品的质量，经计算得到维生素E的含量。