[发明专利]一种对炭疽病原菌有抑制作用的放线菌的筛选方法

摘要

本发明公开了一种对炭疽病原菌有抑制作用的放线菌的筛选方法，涉及微生物技术领域，包括以下步骤：A：样品采集、B：制备土壤悬液、C：培养、D：初筛和E：复筛，最终筛选出对炭疽病原菌有抑制作用的放线菌。本发明通过初筛和复筛的方式快速地筛选出对炭疽病原菌有抑制作用放线菌，可以增加新颖抗菌活性菌株及抗菌活性物质的几率，并且整个筛选过程快速，操作简单，劳动强度较小，能够快速、直观、高效的筛选到抗菌活性的细菌和放线菌，为抗菌活性细菌和放线菌的筛选研究提供了极大方便。

主权项

1.一种对炭疽病原菌有抑制作用的放线菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：A：样品采集：从油茶树下的土地中随机采集土样3份，分装标记后带回实验室；B：制备土壤悬液：称取8‑10g土壤倒入装有磷酸缓冲液的锥形瓶中，振荡10min后得到上清液，并将此以十倍稀释的方式，稀释成10‑4、10‑5以及10‑6的悬液。C：培养：将10‑4、10‑5以及10‑6的土壤悬液分别涂在高氏一号培养基上，，每个梯度3‑5次重复，涂布均匀，，倒置于28℃恒温培养5‑10天，得到培养的放线菌；D：初筛：采用平板对峙法，将病原菌从PDA培养基上活化后，用5‑7mm的打孔器制成标靶菌备用，取其中一个标靶菌，菌丝面朝下，接于PDA培养基中央，在离指示菌等距离接入纯化后的放线菌，进行对峙培养，以无菌水5ml代替放线菌与PDA培养基混匀作为CK对照重复3‑5次，于28℃倒置培养至CK长满平板后观察、测量抑菌圈，将拮抗作用显著的放线菌和细菌进行保存；E：复筛：将初筛到的拮抗效果好的生防菌接种于放线菌液体发酵培养基中，28℃、100‑200r/min摇床培养5‑7天左右，用细菌过滤器过滤，取过滤后的发酵液5ml与20ml的PDA培养基混合均匀倒平板，28℃恒温培养1‑3天后，取出平板上的单菌落，然后将单菌落接入LB培养基平板上的标靶菌中，作为单皿多次重复抑制试验，3‑5天后观察抑菌距离的宽度，筛选出抑菌圈直径大于20mm的纯种放线菌，得到对炭疽病原菌有抑制作用的放线菌。