[发明专利]一种胃粘膜组织蛋白样品的制备方法在审
| 申请号： | 201811440172.5 | 申请日： | 2018-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN109554425A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 郑小伟;孔丽娅;余王琴;刘晓谷 | 申请（专利权）人： | 浙江中医药大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 310053 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明属于生物医学技术领域，公开了一种胃粘膜组织蛋白样品的制备方法，出生12h内的胎鼠，取出胃组织，用无菌PBS清洗胃组织表面2次，去除结缔组织，之后再用无菌PBS清洗一次；将冲洗干净的胃组织剪成2‑3mm2的碎块，之后转入15ml离心管中，加入0.1％胶原酶Ⅱ+0.2mg/ml透明质酸酶的混合酶，水浴振荡消化；最后用完全培养基重悬细胞，转入培养瓶中，置于37℃，5％CO2培养箱条件下培养。本发明能够有效的去除胃粘液，把胃粘膜制备成单细胞悬液，可以进行胃粘膜流式细胞术等单细胞的蛋白分析研究，为在胃组织开展细胞组学做好准备。本发明解决了过程繁琐，耗时长；费用高的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 胃组织 制备 胃粘膜组织 蛋白样品 无菌PBS 胃粘膜 去除 清洗 碎块 转入 生物医学技术 流式细胞术 透明质酸酶 完全培养基 蛋白分析 结缔组织 水浴振荡 细胞悬液 混合酶 胶原酶 离心管 培养瓶 胃粘液 细胞组 胎鼠 重悬 冲洗 耗时 取出 细胞 消化 研究 | ||
【主权项】：
1.一种胃粘膜组织蛋白样品的制备方法，其特征在于，所述胃粘膜组织蛋白样品的制备方法包括：首先将冲洗的胃组织剪成碎块，之后转入离心管中，加入0.1％胶原酶Ⅱ+0.2mg/ml透明质酸酶的混合酶，水浴振荡消化，收集滤液，离心，去除上清液，再用无菌PBS重悬；其次用无菌PBS配置40％，30％，20％的Precoll各3ml，按密度由高至低依次加入离心管中，再将细胞悬液置于最上层，离心；离心完后吸取下层细胞，离心，用无菌PBS重悬清洗两次；最后用完全培养基重悬细胞，转入培养瓶中，置于培养箱中培养。
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