[发明专利]一种三维视网膜组织的冷冻保存及复苏方法

摘要

本发明公开了一种三维视网膜组织的冷冻保存及复苏方法。该方法的冻存步骤主要为：选取适合冻存的三维视网膜组织，悬浮于RDM培养液，然后转移至冻存管，按等体积比加入2×冷冻保存液，待三维视网膜组织沉至管底后吸走部分的上清液，密封冻存管，置于‑80℃中过夜降温，再移入液氮中保存；最后将保存的视网膜组织解冻复苏即可置于培养箱进行悬浮培养。本发明提供的方法可重复性好，成功率高，复苏成活率可高达80～90％，使得三维视网膜组织的发育进程可控、保存运输可靠，并保证复苏的组织结构完整、活性良好。

主权项

1.一种三维视网膜组织的冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：选取三维视网膜组织，将其悬浮于RDM培养液中，得到三维视网膜组织悬液，然后将三维视网膜组织悬液转移至冻存管中，缓慢加入冷冻保存液并振荡混匀，冷冻保存；所述的RDM培养液为DMEM混合培养基中添加有B27、NEAA和Antibiotic‑Antimycotic的溶液；所述的冷冻保存液含有DMSO、蔗糖、FBS和Blebbistatin。