[发明专利]一种基于水通道蛋白3的体外保湿功效判断方法

摘要

本发明公开一种基于水通道蛋白3的体外保湿功效判断方法，选取表皮细胞置于完全培养基中培养，然后对检测样品进行细胞毒性测试并设置相应的浓度，接着配置阳性对照组及其浓度，分别设置为阳性对照组和实验组，对所述作用后的表皮细胞分别进行RNA提取，然后反转录得到cDNA，对所述cDNA使用实时定量PCR的方法进行水通道蛋白3的mRNA的定量，对所述作用后的表皮细胞进行蛋白提取，使用ELISA的方法进行蛋白定量，最后根据mRNA及蛋白水平的变化来判断样品的保湿功效；本发明可广泛应用于基于水通道蛋白3的保湿功效原料的筛选以及产品的功效评价，实验简单易行，可使用细胞系进行实验，周期短，实验可重复性较好。

主权项

1.一种基于水通道蛋白3的体外保湿功效判断方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选取表皮细胞置于完全培养基中培养，所述完全培养基为含有10％胎牛血清的DMEM完全培养基，培养所述表皮细胞密度至80％‑90％；2)对检测样品进行细胞毒性测试的步骤，包括设置不具有细胞毒性的检测样品的最高浓度为100mg/ml，设置具有细胞毒性的检测样品以IC20为最高浓度，检测样品设置至少三个梯度浓度；3)配置阳性对照物浓度的步骤，设置阳性对照物为全反式维甲酸，所述阳性参照物的浓度设置为0.1μmol·L‑1、1μmol·L‑1；4)将所述阳性参照物与检测样品分别作用于所述表皮细胞4小时，依次设置为阳性对照组和实验组；对水通道蛋白3进行引物设置及验证；5)对作用后的所述阳性对照组和实验组分别进行RNA提取，然后分别反转录得到cDNA，对分别得到的所述cDNA分别使用实时定量PCR的方法进行水通道蛋白3的mRNA定量；6)对作用后的所述阳性对照组和实验组分别进行蛋白提取，使用ELISA方法进行蛋白定量；7)根据对所述实验组的mRNA定量及蛋白水平的变化与对所述阳性对照组的mRNA定量及蛋白水平的变化来判断检测样品的体外保湿功效，若所述实验组中水通道蛋白3的变化趋势与所述阳性对照组有同样的趋势，则判断检测样品为有效的保湿功效。