[发明专利]一种石油污染土壤微生物处理方法

摘要

本发明涉及一种石油污染土壤微生物处理方法，属于污染土壤修复技术领域。技术方案是：用污染土壤为基材培养石油降解混合菌液，从中筛选出即能降解石油又产生表面活性剂能力最强的单菌落；石油降解混合菌液和表面活性剂菌均分别通过石油降解菌培养基制成体积为0.5m³的石油降解菌和体积为0.5m³的表面活性菌，将体积为0.5m³的石油降解菌和体积为0.5m³的表面活性菌用9m³牛肉蛋白胨液体培养基混合发酵至10 m³，形成菌剂；测定污染土壤中有机碳、氮、磷含量，按重量比，C:Ｎ：Ｐ=100：10：1的比例补充营养；按重量比，将6%木屑和5‑10%菌剂与污染土壤混合搅拌均匀，铺在地面上。本发明通过微生物生物降解使土壤得到修复，没有二次污染，成本低、处理效果好。

主权项

1.一种石油污染土壤微生物处理方法，其特征在于如下步骤：（1）提取石油污染物：用萃取剂从污染土壤中提取石油污染物，并将萃取剂蒸发掉待用；（2）石油污染物降解菌的富集和培养：取10g污染土壤加入已无菌的100ml石油降解液体培养基中，在温度为30℃，在转速为150转/min的摇床中培养5天后，再按10%接种率，接种在另一100ml石油降解液体培养基中，连续富集培养6次，形成石油降解混合菌液；所述石油降解液体培养基：将3g 的NaNO3、1g 的K2HPO4、0.5g 的MgSO4· 7H2O、0.5g的KCl、0.01g 的FeSO4·7H2O和0.02g CaCl2加入步骤（1）中提取的石油污染物中，提取的石油污染物的体积为1ml，用蒸馏水稀释至1000ml，PH为7.2‑7.6；用步骤（2）中富集培养的石油降解混合菌液做为种子液，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的石油降解菌；（4）表面活性剂菌的筛选：用石油降解液体培养基将步骤②培养的石油降解混合菌液划线分离，将分离出的单菌落，分别用石油降解液体培养基发酵培养3天，得到培养液；取1ml培养液放入盛有60ml蒸馏水和8ml液体石蜡的90mm玻璃平皿中；在玻璃平皿中，如果产生排油圈，证明培养液中存在表面活性剂，排油圈越大，表面活性剂能力越强，从中筛选出表面活性剂能力最强的菌，该菌为表面活性剂菌；（5）表面活性剂产生菌培养：将步骤（4）选出的表面活性剂菌，按10%接种率，连续用石油降解液体培养基发酵培养至0.5m3，形成体积为0.5m3的表面活性剂菌；（6）将步骤（3）和步骤（5）制成的体积为0.5m3的石油降解菌和体积为0.5m3的表面活性菌用9m3牛肉蛋白胨液体培养基混合发酵至10 m3，形成菌剂；所述牛肉蛋白胨液体培养基：牛肉蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g和蒸馏水1000ml；（7）测定污染土壤中有机碳、氮、磷的含量，按重量比，C：Ｎ：Ｐ=100：10：1的比例进行补充营养；按重量比，将6%的木屑和5‑10%的菌剂与污染土壤混合搅拌均匀，铺在地面上，厚度为300mm；维持污染土壤的水份为饱和含水量的30－60%，每2‑5天翻耕一次。