[发明专利]一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法

摘要

本发明提供一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法，涉及酶制剂制备技术领域领域，该方法方法包括以下步骤：(1)菌种培养：配制种子液态培养基，将产生右旋糖酐酶的菌株接种到该液态培养基中恒温培养；(2)发酵培养：配制发酵培养基，接种菌种恒温发酵；(3)粗酶液分离和提纯得酶制剂；本发明能够制备出高活性右旋糖酐酶酶制剂，作为蔗糖生产工业添加剂，解决蔗糖生产工业所面临的的含有右旋糖酐的情况。

主权项

1.一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)菌种培养：配制种子液态培养基，具体操作为选取250g红薯，去皮洗净，切成1‑3cm方块，加水1.5L，水开后继续煮沸30‑45min，滤去红薯块，得到滤液补足至1.5L，向红薯滤液中添加碳源、氮源、铁源、磷源、镁源和钾源，调节初始pH值为5.0‑6.0，然后将产生右旋糖酐酶的菌株接种到该液态培养基中，将接种后的液态培养基置于28℃恒温培养箱中培养20‑30h；(2)发酵培养：配制发酵培养基，具体操作如步骤(1)制备红薯滤液，加入氮源、碳源、磷源、铁源、镁源和钾源，将步骤(1)中制备的含有菌种的液态培养基混合液加入发酵培养基进行接种，接种量为发酵培养基液体体积分数的2‑4％，调节初始pH值为5.0‑6.0，然后置于28℃，转速为200r/min的恒温摇床中培养进行培养，培养时间为85‑100h；(3)粗酶液分离：将微生物发酵液采用转鼓式真空吸滤机离心分离，除去菌体，得到富含右旋糖酐酶的上清液作为粗酶液；(4)酶制剂纯化：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对步骤(4)制备出的粗酶液进行提纯，具体操作为用除脂板框电泳仪制备一定尺寸的凝胶板，胶浓度为6‑8％，加样体积为10‑15ml，电流为24‑32mA，在pH为7.0时电泳4‑5h，从凝胶板两侧各切下3mm的胶条，立即置于0.1％的考马斯亮蓝G250溶液中染色，待蓝色区带出现后，将胶条用去离子水冲洗干净放回原位，将凝胶板上剩余部分切下来，用4ml蒸馏水在4℃抽提，静置一夜后过滤除去凝胶，洗涤后常温干燥，得到右旋糖酐酶酶制剂，将右旋糖酐酶酶制剂存放于4‑5℃冷藏保存。