[发明专利]一种遗传性妇科肿瘤的基因文库构建方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种遗传性妇科肿瘤的基因文库构建方法和试剂盒，涉及ATM,BARD1,BRCA1，BRCA2，BRIP1，CDH1，CHEK2，NBN，PIK3CA，PALB2，PTEN，RAD51C，RAD51D，STK11，TP53，MSH2，MLH1，MSH6，PMS2，EPCAM共20个基因的突变。目标区域为以上20基因的编码氨基酸的外显子区域及外显子上下游各20碱基区域。为保证目标区域全部覆盖，PCR扩增过程中所必须的引物组被分离为两个独立引物组，分别进行目标区域扩增。而后将PCR产物进行测序标签连接、文库洗脱及再扩增，扩增后纯化，得到测序用文库。该建库方法步骤简单快速，有效降低了文库构建的成本，且涵盖了妇科肿瘤的相关基因。结合高通量测序仪，可快速准确得到相关基因变异，对遗传性妇科肿瘤有重要意义。

主权项

1.一种遗传性妇科肿瘤的基因文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)DNA质量标准：受试者样本的基因组DNA，经过核酸提取、质量检测后，要求基因组DNA符合相应的控制标准；(2)目标区域扩增：利用上述(1)DNA及合成的5’端磷酸化修饰的相应引物组，对目标区域进行PCR扩增；(3)测序标签连接：在DNA连接酶作用下利用上述步骤(2)的PCR产物连接高通量测序平台专用测序标签，测序标签含有区分样本的特异性标签序列；(4)文库纯化：步骤(3)的产物中加入纯化磁珠后混匀纯化；(5)产物洗脱及扩增：在上述步骤(4)中加入PCR扩增预混液，进行PCR扩增反应；(6)扩增产物纯化：在上述步骤(5)的PCR产物中加入磁珠纯化即得文库；(7)文库质检：使用Qubit荧光计对步骤(6)中文库进行定量质检。