[发明专利]一种遗传性主动脉疾病的基因检测文库的构建方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种遗传性主动脉疾病的基因检测文库的构建方法和试剂盒，涉及ACTA2，COL3A1，FBN1，MYH11，MYLK，SMAD3，TGFBR1，TGFBR2的基因突变。为了保证目标区域(待测基因全编码区，以及可变剪切区)全部被覆盖，并避免相邻扩增子的引物之间形成引物二聚体或短片段，PCR扩增引物被分离成两个独立的引物池，分别进行多重PCR扩增，再进行引物序列消化、连接测序接头、文库纯化并质检，最终构建检测文库。该方法建库步骤简便快速，有效降低成本，减少工作量，变异类型全面、检测准确率达到100％、通量高。

主权项

1.一种遗传性主动脉疾病的基因检测文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)DNA质量标准：提供受试者样本的基因组DNA，经过核酸提取、质检后，要求DNA符合一定质控标准；(2)多重PCR扩增：利用上述DNA文库从高通量测序平台自动合成覆盖全部基因的扩增引物文库，对目标区域进行多重PCR扩增；(3)引物序列消化：将步骤2得到的引物扩增产物混合，进行消化反应；(4)连接测序接头：连接高通量半导体测序平台专用的测序接头，含样本标签序列，在DNA连接酶的作用下，将测序接头与步骤3的消化产物连接；(5)文库纯化：步骤(4)得到的连接产物中加入纯化磁珠,混匀，置于磁力架上，直到溶液澄清后，弃掉上清，使用乙醇清洗磁珠，离心，吸尽残余液体，干燥，加入Tris‑EDTA缓冲液,吹吸混匀，室温放置，澄清后即得纯化文库；(6)文库质检：使用Real‑Time PCR对纯化文库定量质检。