[发明专利]一种高GC含量基因的零背景克隆方法及其应用有效
| 申请号： | 201811496751.1 | 申请日： | 2018-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN109735531B | 公开（公告）日： | 2021-02-26 |
| 发明（设计）人： | 刘国世;李广栋;张鲁;吕东颖;姚昱君;朱天奇;姬鹏云;连正兴;韩红兵;吴英杰 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/12;C07K14/47 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高GC含量基因的零背景克隆方法及其应用。本发明通过筛选设计引物，优化扩增体系，运用改良的Slow‑down PCR方法成功克隆出高GC含量的绵羊Kiss1基因的完整CDS区和部分5＇及3＇非翻译区序列并进行生物信息学分析。本发明提供的绵羊Kiss1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明克隆得到的绵羊Kiss1基因在研究抑制肿瘤转移和调控家畜生殖功能方面有广阔的应用前景。本发明为家畜Kisspeptin相关神经肽的研究提供了新的研究对象，本发明提供的克隆方法可以给其他高GC含量的基因克隆提供理论参考。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gc 含量 基因 背景 克隆 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高GC含量基因的零背景克隆方法，其特征在于，运用Slow‑down PCR方法，对目标基因的模板DNA或cDNA进行PCR扩增，PCR所用引物长度在20‑30bp之间，GC含量在60％‑75％之间，Tm>70℃，Tm差异<1℃。
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