[发明专利]一种高效重组痘苗病毒载体及其建立方法在审
| 申请号： | 201811502766.4 | 申请日： | 2018-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN109536529A | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 郭斐;许丰雯;张迪 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院病原生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/863 | 分类号： | C12N15/863;C12N15/65;C12N7/01;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 于鹏 |
| 地址： | 100730*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明建立了一种高效重组痘苗病毒载体的系统，包括高效重组痘苗病毒载体及其建立方法。本发明利用CRISPR‑Cas9技术敲除痘苗病毒天坛株TK区，然后转染带有EGFP的重组质粒pJ2R‑EGFP。通过荧光筛选，获得缺失TK并插入EGFP的重组病毒，建立一种高效重组痘苗病毒载体的系统。通过分子克隆技术、Western Blot实验、免疫荧光、病毒噬斑形成试验，发现在第一轮重组病毒筛选过程中重组率比传统同源重组方法有所提高。进一步利用PCR技术、琼脂糖凝胶电泳、测序验证得到的重组病毒准确在特定位点被改造。本发明将痘苗病毒载体的重组率提高，为其在疫苗载体构建、肿瘤免疫治疗等方面提供应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 重组痘苗病毒 重组病毒 痘苗病毒天坛株 琼脂糖凝胶电泳 痘苗病毒载体 分子克隆技术 肿瘤免疫治疗 病毒噬斑 免疫荧光 同源重组 疫苗载体 荧光筛选 重组质粒 测序 构建 敲除 位点 转染 验证 筛选 试验 应用 改造 发现 | ||
【主权项】：
1.一种高效重组痘苗病毒载体，其特征在于，其为中国天坛株痘苗病毒缺失TK基因并插入EGFP基因的重组病毒。
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