[发明专利]一种铜离子人工抗原及其应用

摘要

本发明提供一种铜离子人工抗原及其应用，还提供了一株分泌抗重金属铜离子单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用；该杂交瘤细胞株能够分泌抗重金属铜离子单克隆抗体，本发明还提供了杂交瘤细胞株的制备方法，和抗重金属铜离子单克隆抗体的制备方法；本发明制备得到的单克隆抗体特异性较强，对铜离子具有较好地灵敏度，能够用于快速检测重金属铜离子。

主权项

1.一种铜离子人工抗原，其特征在于，该铜离子人工抗原由以下步骤制得：称取5‑8mg 2‑S‑[4‑(3‑氨基丙基)‑苯]‑1，4，7三氮杂环壬烷‑1，4，7‑三乙酸，溶解于2mL 0.01mol·L^‑1、pH 7.4 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液，制得螯合剂溶液，此溶液为A液；称取70.33mg硝酸铜溶解于5mL超纯水中，制得浓度为7.5×10^‑2mol·L^‑1的硝酸铜溶液，此溶液为B液；将150～200μL的B液加入到A液中，室温下避光反应3～5h，此反应液为C液；向C液中加入500～800μL，20mmol·L^‑1的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此反应液为D液；称取20～30mg牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA溶解于3mL HEPES，室温下磁力搅拌混匀，此反应液为E液；将D液加入到E液中，室温下避光反应24h，后加入150～200μL硼氢化钠溶液，室温下避光反应1h；反应液先用8KD的透析袋透析3～5次，再用30KD的超滤离心管7000～9000r·min^‑1离心洗涤3～5次，用5～10mL的0.01mol·L^‑1，pH 7.4的HEPES溶液复溶，后分装，‑20℃低温保存，制得重金属铜人工抗原Cu‑L₄‑BSA或者Cu‑L₄‑OVA，L₄表示2‑S‑[4‑(3‑氨基丙基)‑苯]‑1，4，7三氮杂环壬烷‑1，4，7‑三乙酸；合成路线为：