[发明专利]长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法在审
| 申请号： | 201811524125.9 | 申请日： | 2018-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN109652452A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 张华堂;赖国旗;唐雨微;刘阳;赵中华;曹敏;向钦;吕小琴;伍悦 | 申请（专利权）人： | 重庆市科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;A01K67/027 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 邹晓艳 |
| 地址： | 401123 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法，包括如下步骤：1)提取乙型肝炎患者血清病毒DNA，使用引物对HBVF/HBVR进行PCR扩增；2)将PCR产物克隆到pEASY‑HBV载体中，挑选阳性克隆；3)提取阳性克隆的质粒，将提取到的质粒用BspQI内切酶酶切，回收酶切片段并纯化，用T4连接酶将其环化并纯化，得到HBV cccDNA；4)将cccDNA注射入小鼠中，构建乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型。本发明通过一种简单、快速和方便的方法，成功的构建了一个能有效模拟HBV慢性感染的具有免疫活性的CBA/CaJ小鼠模型，HBsAg、HBeAg和HBcAg的表达均可长达26周。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 乙型肝炎病毒 实验动物模型 阳性克隆 质粒 乙型肝炎患者血清 乙型肝炎e抗原 注射入小鼠 酶切片段 免疫活性 小鼠模型 阴性小鼠 携带 病毒DNA 内切酶 环化 酶切 引物 回收 成功 | ||
【主权项】：
1.一种长期携带乙型肝炎病毒的实验动物模型构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1)提取乙型肝炎患者血清病毒DNA，使用引物对HBVF/HBVR进行PCR扩增，引物序列为：HBVF：5’‑CCGGAAAGCTTATGCTCTTCTTTTTCACCTCTGCCTARTCATC‑3’，HBVR：5’‑CCGGAGAGCTCATGCTCTTCAAAAAGTTGCATGGTGCTGGT‑3’；2)将获得的PCR产物克隆到pEASY‑HBV载体中，挑选阳性克隆；3)提取步骤2)中阳性克隆的质粒，将提取到的质粒用BspQI内切酶酶切，回收酶切片段并纯化，用T4连接酶将其环化并纯化，得到HBV cccDNA；4)将步骤3)得到的HBV cccDNA注射入小鼠中，即构建了乙型肝炎e抗原阴性小鼠模型。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于重庆市科学技术研究院，未经重庆市科学技术研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811524125.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
