[发明专利]一种提高农杆菌介导的玉米遗传转化效率的方法

摘要

本发明涉及一种植物转基因技术领域，特别涉及一种提高农杆菌介导的玉米遗传转化效率的方法。通过超声波处理种子获得萌动种子、含目的基因农杆菌的培养、侵染种子与共培养、脱菌与选择培养和转基因植株分子检测的步骤，获得转基因植株。使用本发明方法可有效缩短转基因转化的时间，同时提高农杆菌介导的玉米遗传转化的效率。

主权项

1.一种提高农杆菌介导的玉米遗传转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)种子的处理：玉米种子用体积浓度为45～55％的次氯酸钠溶液浸泡消毒5～15min后，用无菌蒸馏水清洗2～3次，用无菌滤纸吸干种子表面水分，将种子放入种子培养液中，于40℃～55℃下黑暗中超声波处理后，静置10～20min，捞出种子，放入40℃～55℃热水中浸泡30～50min，得到萌动种子；(2)农杆菌的培养：将含有目的基因的农杆菌单菌放入农杆菌培养液中，于25℃～28℃、220～280rmp下震荡培养，待OD600至0.6～0.8时，于25℃～28℃、5000～6000rmp下离心，弃上清液，得农杆菌悬浮液，将所述农杆菌悬浮液与等体积的甲液混均，配制成农杆菌侵染液；(3)侵染与共培养：用步骤(2)的农杆菌侵染液浸泡感染步骤(1)的萌动种子，捞出种子，用无菌滤纸将种子上的菌液吸干后，放在共培养液中，于25℃～28℃下共培养3～4d；(4)脱菌与选择培养：将步骤(3)共培养后的种子放在沙土上培养，沙土厚度为0.5cm～1.0cm，向沙土中倒入筛选培养液，使沙土含水量在65％～75％，人工气候箱25℃～28℃下培养7～10d，期间用筛选培养液浇湿沙土3～5次，筛选出能正常生根发芽的植株；(5)转基因植株分子检测：取步骤(4)植株的叶片，用CTAB法提取全基因组DNA，通过PCR扩增和Southern杂交，检测目的基因片段是否成功导入植株。