[发明专利]精子活动力分级计数方法

摘要

本发明公开了精子活动力分级计数方法，主要涉及精子计数技术领域。方法主要为使用固定稀释液和TBS缓冲液分别稀释精液，并分别计数，从而获得A液精子总数以及B液NP和IM的总数，校验误差后，即可通过计算获得运动活跃型(PR)精子的数量，确定精子的活动力。本发明能够避免精子运动，以及判断精子活动等级对计数的干扰，较大程度降低活动力分级的难度，获得准确的活动力分级结果。

主权项

1.精子活动力分级计数方法，其特征在于，包括：1)备液，A液：即固定稀释液——使用1000ml纯水溶解50g NaHCO₃和10ml 35％的甲醛溶液，B液：TBS缓冲液；2)确定稀释倍数：将液化后的精液制成湿片，根据每×400视野的精子数，确定稀释倍数，对应的稀释度如下：3)根据确定的稀释倍数，分别使用A液和B液对精液稀释为同一倍数并混匀后，分别充入改良的纽鲍尔计数板的计数池，静置3～5分钟；4)计数：A液——A液精子被稀释液固定后，基本不动，对A液计数板的中央大方格进行精子计数，直到至少计得200个精子并数完完整的一行后，得到A液精子总数；B液——静置后B液的NP和IM型的精子因活动力不强会沉到底部，PR型的精子会不定向运动，计数与A液对应方格的B液的NP和IM型精子得出B液NP和IM的总数；5)校验差异值：重复步骤3)和步骤4)，获得第二组计数数据，比较两组数据的差异值是否在可允许的范围内，如果是则数据有效，如果超过差异值则重复步骤3)和步骤4)直到两组数据的差异值在允许的范围内，所允许的差异值如下所示(基于95％的可信区间)：6)计算精子活力：用A液精子总数减去B液NP和IM的总数，即得运动活跃型(PR)精子的数量。