[发明专利]非破坏性从单头蓟马类昆虫标本中高效提取DNA的方法

摘要

非破坏性从单头蓟马类昆虫标本中高效提取DNA的方法属生物技术领域，本发明包括：取样：将单头蓟马类昆虫从酒精溶液中取出；扎孔：用00号昆虫针对蓟马腹部刺穿；消化：将扎孔的标本放入装有消化液离心管中，置金水浴上孵育；标本回收：孵育结束后，吸取保留的虫体表皮至酒精溶液新的离心管中；DNA沉淀和吸附：在孵育好的消化液中加一定比例氯仿：异戊醇，吸取上清至新的无菌离心管中；漂洗：加入一定量的Buffer至过滤柱，室温离心，丢弃滤液；吹干；洗脱DNA。本发明非破坏性从单头蓟马类昆虫标本中高效提取DNA，所回收的凭证标本完整且提取的DNA纯度高，分类准确，能满足种类鉴定的需要。

主权项

1.一种非破坏性从单头蓟马类昆虫标本中高效提取DNA的方法，其特征在于，包括下列步骤：1.1取样：将单头蓟马类昆虫从75％的酒精溶液中取出，在干净滤纸上放置30s，用镊子将标本转移至载玻片上，再将载玻片放置在解剖镜的视野中央；1.2扎孔：将单头蓟马类昆虫的腹部朝上，用无菌的00号昆虫针对蓟马的腹部刺穿4～6下，其中第I腹节除外；1.3消化：将扎孔的单头蓟马类昆虫放入装有250～350ul消化液和20～25ul蛋白酶K的1.5ml离心管，再将离心管放入金水浴上孵育3～4小时；1.4标本回收：孵育结束后，吸取保留的虫体表皮至50％～75％酒精溶液新的1.5ml离心管中，进行后续的玻片制作；1.5DNA沉淀和吸附：在孵育好的消化液中加氯仿：异戊醇为240:10～336:14，涡旋混匀：30S，室温离心：10000g,5min，离心后吸取上清至新的1.5ml无菌离心管中,加入同等体积的Buffer CBL，无水乙醇，涡旋，孵育：60℃，10min进行DNA微型吸附柱过柱环节，室温离心，弃滤液，将DNA微型吸附柱安装到收集管上；1.6漂洗：将Buffer HB：450～500ul加至过滤柱，室温离心，丢弃滤液，再重复2次加入DNA Wash Buffer:600～700ul，室温离心：10000g,1min，弃掉滤液，再将DNA吸附柱安装到收集管上，室温空管离心：10000g,2min；1.7吹干：丢掉收集管，将DNA吸附柱安装到新的无菌1.5ml离心管上，在超凈工作台内高档风吹干:15min；1.8洗脱：向吹干的吸附柱中加入30ul Elution Buffer,室温放置:2min，离心:1min，洗脱DNA重复二次，将DNA在‑20℃保存。