[发明专利]一种甲型肝炎病毒的负链RNA分子生物学检测方法及应用

摘要

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种甲型肝炎病毒的负链RNA分子生物学检测方法及应用，所述方法以HAV(‑)RNA为模板，运用RT‑PCR法进行(‑)RNA的检测。若检测到(‑)RNA，则说明有HAV在复制，即样品中有活着的HAV，若检测不到(‑)RNA，则说明没有HAV复制，即样品中没有活的HAV；同时，检测到(‑)RNA时，亦可依据(‑)RNA的含量来推断样品中活的HAV的量，进而推算出样品中的HAV滴度。RT‑PCR的高灵敏度性使得可在较短的培养时间内检测出代表HAV复制的(‑)RNA的存在与否及其相对含量，进而在更少的时间内完成病毒灭活效果的验证和病毒滴度的测定，加速甲肝疫苗的研发进度以及减少成品甲肝疫苗的库存期。

主权项

1.一种甲型肝炎病毒的负链RNA分子生物学检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、培养人二倍体细胞，并接种HAV，得到带病毒细胞；S2、从步骤S1得到的带病毒细胞中提取总RNA；S3、以所述总RNA作为模板，采用第一引物进行逆转录反应，用核糖核酸酶处理逆转录反应体系，降解RNA；S4、以步骤S3得到的逆转录反应产物为模板，使用第二引物和第三引物进行第一次聚合酶链式反应，得到第一次聚合酶链式反应产物；S5、以步骤S4得到的产物为模板，使用第四引物和第五引物进行第二次聚合酶链式反应，得到第二次聚合酶链式反应产物；S6、将所述第一次聚合酶链式反应产物、第二次聚合酶链式反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，判断是否存在负链RNA。