[发明专利]一种检测微小残留病MRD的方法

摘要

本发明提供了一种基于高通量测序研发的淋系血液癌症如T/B系白血病、淋巴瘤、骨髓瘤微小残留病的检测方法，该方法通过添加内参及House Keeping基因，采用带有UMB(Unique Molecular Barcode,单分子标签)的多重PCR引物组对样本分别进行IGH(VDJ)、IGH(DJ)、IGK、IGL、TCRβ、TCRγ、TCRδ、BCL1/IGH、BCL2/IGH的文库构建，将所得的DNA文库通过Illumina HiSeq平台进行测序，并通过生物信息学分析高通量测序结果。本方法在检测癌细胞的同时可发现新突变的癌细胞，并应用高通量测序技术结合生物信息学分析，MRD的检测灵敏度至少可在100万个细胞中检测到一个癌细胞，即10‑6(0.0001％)。本方法不仅可以定量分析癌细胞数量，达到微小残留病检测目的，而且可以纠正PCR扩增产生的碱基错配导致的序列突变和文库测序过程中产生的序列读取错误。

主权项

1.一种检测微小残留病MRD的多重PCR引物组，其特征在于，包括以下引物对：检测IgH(VDJ)的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:1‑16所示，下游引物序列如SEQ ID NO:24所示；检测IgH(DJ)的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:17‑23所示，下游引物序列如SEQ ID NO:24所示；检测IgK的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:25‑34所示，下游引物序列如SEQ ID NO:35‑37所示；检测IgL的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:38‑54所示，下游引物序列如SEQ ID NO:55‑57所示；检测TRB的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:58‑88所示，下游引物序列如SEQ ID NO:89‑100所示；检测TRG的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:101‑106所示，下游引物序列如SEQ ID NO:107‑109所示；检测TRD的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:110‑112所示，下游引物序列如SEQ ID NO:113‑116所示；检测BCL1/IGH的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:117所示，下游引物序列如SEQ ID NO:118所示；检测BCL2/IGH的引物对，上游引物序列如SEQ ID NO:119‑127所示，下游引物序列如SEQ ID NO:118所示；其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。