[发明专利]一种基于功能化石墨烯量子点的双循环及双猝灭体系的荧光生物传感器的制备方法

摘要

本发明涉及一种基于功能化石墨烯量子点的双循环及双猝灭体系的荧光生物传感器的制备方法，称取原料柠檬酸、组氨酸和五乙烯六胺混合均匀，其中柠檬酸、组氨酸、五乙烯六胺的摩尔比为0.01:0.1:1～1:1:1，加入去离子水后进行超声溶解得到反应液，将反应液放入烘箱内，在烘箱温度为150～250℃条件下反应0.5～10h，反应结束后直接得到五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His粗产物，然后再得到LDNA‑封端的五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His溶液，最后形成G‑四链体/DNA酶，最后加入0.5‑100μl的摩尔浓度为0.1‑10μM的H₂O₂，得到双循环及双猝灭体系的荧光生物传感器。

主权项

1.一种基于功能化石墨烯量子点的双循环及双猝灭体系的荧光生物传感器的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）称取原料柠檬酸、组氨酸和五乙烯六胺混合均匀，其中柠檬酸、组氨酸、五乙烯六胺的摩尔比为0.01:0.1:1～1:1:1，加入去离子水后进行超声溶解得到反应液，将反应液放入烘箱内，在烘箱温度为150～250℃条件下反应0.5～10h，反应结束后直接得到五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His粗产物；（2）将步骤（1）中的五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His粗产物配制成25‑200mg/ml的水溶液后置于透析袋中在去离子水中进行透析，去除溶液中的小分子物质，透析10‑72h后，将透析袋中的溶液进行冷冻干燥，得到固体五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His；（3）将五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His固体溶解在PBS缓冲溶液中，五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His的质量浓度为0.2mg/ml；（4）取0.1‑5μM的 LDNA溶液30‑100μl加入离心管中，然后依次加入0.1‑10 ml TE缓冲溶液、10‑100 mg/ml 的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐溶液10‑100 μl和10‑50mg/ml 的N‑羟基琥珀酰亚胺溶液5μl，将离心管置于空气浴振动器中活化，将活化的LDNA溶液与步骤（3）中100‑500μl的五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His溶液混合孵育，超滤数次去除未缀合的LDNA，得到LDNA‑封端的五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His溶液，水洗将溶液备用；（5）向LDNA‑封端的五乙烯六胺‑组氨酸石墨烯量子点PEHA‑GQD‑His溶液中依次加入MB（Molecular beacons）溶液、发夹H1溶液和发夹H2溶液，然后加入20‑500μl 的1pM～1aM 的miRNA溶液，并在20‑40℃下孵育60‑180min，加入20‑500μL溶解在HEPES缓冲液中的摩尔浓度为0.05‑1μM氯化血红素溶液，并在室温下反应10‑90min以形成G‑四链体/DNA酶，最后加入0.5‑100μl的摩尔浓度为0.1‑10μM的H2O2，得到双循环及双猝灭体系的荧光生物传感器。