[发明专利]一种快速检测猪胚胎全基因组转录活性的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测猪胚胎全基因组转录活性的方法。包括如下步骤：将卵母细胞或各期胚胎放入有含有2mM EU的预热的完全培养基中孵育；卵母细胞或各期胚胎样品收集。将与EU共孵育过后的卵母细胞或各期胚胎进行固定、通透；“click”反应标记荧光染料。将与EU共孵育、固定、通透后的卵母细胞或各期胚胎放入Click‑iT reaction cocktail中孵育30min，使其标记上荧光染料。将带有荧光染料卵母细胞或各期胚胎进行压片、封片。EU染色可以大大缩短的检测时间且操作简单、方便、快捷，是一种理想的快速检测猪胚胎全基因组转录活性的方法。

主权项

1.一种快速检测猪胚胎全基因组转录活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)配制含有2mM EU的完全培养基，在培养皿中做多个50μm的微滴，覆盖石蜡油，放入培养箱中预热；2)将卵母细胞或各期胚胎放入上述培养基中，共孵育1h；3)将步骤2)得到的卵母细胞或各期胚胎放入DPBS/PVP液滴中快速清洗3遍，随后放入4％PFA室温固定15min，再放入DPBS/PVP液滴中清洗3遍，每遍清洗5min；4)将步骤3)得到的卵母细胞或各期胚胎样品置于0.5％Triton X‑100在室温下通透20min，然后在DPBS/PVP液滴中清洗3遍，每遍清洗5min；5)将步骤4)得到的样品放在EU试剂盒中的Click‑reaction cocktail在培养皿中做50μm的微滴，覆盖石蜡油，室温孵育30min，过程避光；6)再将步骤5)得到的样品用EU试剂盒中的Click‑iT reaction rinse buffer洗涤一次；7)将步骤6)得到的样品在DPBS/PVP液滴中快速清洗3遍，然后放置于EU试剂盒中的Hoechst 33342中，室温孵育15min，避光；8)将步骤7)得到的样品在DPBS/PVP液滴中清洗3遍，每遍清洗5min；9)依据样品的多少取相应的盖玻片和载玻片，盖玻片的四角作为大小参考，在载玻片点上适量的凡士林，在凡士林的四个点的中间加入5μm抗荧光淬灭封片液，然后将样品放入，用移卵针拨动至互不重叠，然后盖上盖玻片，用指甲油沿盖玻片四周封好；10)将封好的盖玻片置于荧光倒置显微镜下进行拍照。