[发明专利]植物基因组定点替换的方法

摘要

本发明提供了一种植物基因组定点替换的方法，具体地，本发明涉及一种核酸构建物，本发明采用特定结构的核酸构建物，首次在植物中成功实现了sgRNA引导的碱基定点突变(如T突变为C或A突变为G)。

主权项

1.一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物具有5’‑3’(5’至3’)的式I结构：I1‑Z1‑Z2‑I2   (I)式中，I1为第一整合元件；I2为第二整合元件；Z1为第一表达盒；Z2为第二表达盒；并且，Z1和Z2中的一个表达盒具有Ia结构，而另一个表达盒具有式Ib结构：P1‑S1‑X1‑L1‑X2‑L2‑X3   (Ia)P2‑Y1   (Ib)；式中，P1、S1、X1、L1、X2、L2、X3、P2、Y1分别为用于构成所述构建物的元件；P1为第一启动子，所述第一启动子包括泛素启动子；S1为无或信号肽的编码序列；X1为腺嘌呤脱氨酶(如野生型和/或突变型TadA)的编码序列；L1为无或第一连接肽的编码序列；X2为Cas9核酸酶的编码序列，所述的Cas9核酸酶是无切割活性或单链切割活性的；L2为无或第二连接肽的编码序列；X3为核定位信号的编码序列，所述核定位信号为VirD2；P2为第二启动子；Y1为sgRNA的编码序列；并且，各“‑”为键或核苷酸连接序列。