[发明专利]一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位抗感病池的方法

摘要

一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位抗感病池的方法，包括：以高感品种作母本×高抗不含Bru1基因滇蔗茅作父本配制组合杂交得F1代种子；各组合播种至少1000粒，筛选真实性杂交F1代至少500苗，种植真实性杂交F1代单株确保成活至少400苗，接种褐锈病病菌，调查发病情况，按9级标准评价抗性；分析杂交F1代群体抗病遗传，选取抗感分离比≈3:1遗传分离群体构建抗感病池。本发明方法首次建立了一套系统性构建甘蔗抗褐锈病基因定位抗感病池的方法，为甘蔗抗褐锈病基因定位奠定了基础，提供了技术支撑；本发明方法程序简化，可操作性强，选取抗感分离比≈3:1的与滇蔗茅杂交组合的遗传分离群体构建抗感病池可用于抗褐锈病基因定位。

主权项

1.一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位抗感病池的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)亲本选择:分别选取高抗褐锈病不含Bru1基因滇蔗茅和高感褐锈病甘蔗品种作为亲本；(2)配制杂交组合杂交：以高感褐锈病甘蔗品种作母本×高抗褐锈病不含Bru1基因滇蔗茅作父本配制杂交组合，通过杂交得到F1代种子；(3)杂交组合亲本间多态性引物筛选：筛选出杂交组合在感病和抗病亲本间条带清晰、多态性明显、重复性好的SSR引物；(4)筛选真实性杂交F1代群体：每个杂交组合F1代种子播种至少1000粒，利用步骤(3)所选的SSR引物对杂交组合F1代种子苗进行杂交后代真实性鉴定，每个杂交组合筛选出真实性杂交F1代单株至少500苗；(5)田间人工接种褐锈病病菌：田间种植真实性杂交F1代确保成活至少400苗，用褐锈病病菌孢子悬浮液于傍晚喷雾田间种植的真实性杂交F1代蔗叶接种；首次接种后，第二天按前述接种方式再接种1次；(6)病情调查：接种4‑5周后，调查记录各真实性杂交F1代单株发病情况，逐份材料进行调查，目测每份材料叶片褐锈病侵染面积百分率；(7)抗病性评价：根据各真实性杂交F1代单株发病情况按1‑9级分级标准进行褐锈病抗性评价，其中,叶片无症状为1级高抗；叶片病斑占叶面积10％以下为2级抗病；叶片病斑占叶面积11％‑25％为3级中抗；叶片病斑占叶面积26％‑35％为4级中感；叶片病斑占叶面积36％‑50％为5级感病1；叶片病斑占叶面积51％‑60％为6级感病2；叶片病斑占叶面积61％‑75％为7级感病3；叶片病斑占叶面积76％‑90％为8级高感1；叶片病斑占叶面积91％‑100％为9级高感2；(8)抗性遗传分析：根据真实性杂交F1代群体褐锈病抗性，按1‑3级抗病:4‑9级感病计算杂交后代遗传分离群体抗感分离比，杂交后代遗传分离群体抗感分离比≈3:1，表明其遗传分离群体抗褐锈病基因由显性单基因控制，将其遗传分离群体用于构建甘蔗抗褐锈病基因定位的抗感病池材料；(9)抗感病池构建：在杂交后代遗传分离群体抗感分离比≈3:1的每一个遗传分离群体中选取1级高抗材料至少10株和选取9级高感2材料至少10株，分别提取DNA，每一个遗传分离群体中所选取的1级高抗材料的DNA等量混合构成一个甘蔗抗褐锈病基因定位抗病池，每一个遗传分离群体中所选取的9级高感2材料的DNA等量混合构成一个甘蔗抗褐锈病基因定位感病池。