[发明专利]焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法

摘要

本发明公开了一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法，包括以下步骤：将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液S，再用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍，即溶液A(S₄₀)。用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，37±1℃试管恒温仪中，保温60±2分钟，将试管从恒温仪中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性；凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性。本发明的试验方法科学，试验结果准确，填补了焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素检查方法的空白，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法，其特征在于：包括以下步骤：a.溶液的制备溶液A：取焦磷酸柠檬酸铁原料，加入细菌内毒素检查用水，配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液S，用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍，即溶液A(S40)；溶液C：用细菌内毒素检查用水与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液，即溶液C，每一浓度平行各做2支；溶液B：将溶液A与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2λ、1λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液，即溶液B，每一浓度平行各做4支；溶液D：细菌内毒素检查用水，平行做2支；b.细菌内毒素限值的确定依据《中国药典》2015版四部通则1143“细菌内毒素检查法”，用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，初步将焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值设定为L＜40EU/g，根据公式MVD＝CL/λ，计算MVD值，并进行细菌内毒素干扰试验；若试验结果存在干扰，将内毒素限值设定为＜50EU/g，重新进行干扰试验；c.干扰实验将试管中溶液轻轻混匀后，垂直放入37±1℃试管恒温仪中，保温60±2分钟；将试管从恒温仪中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性；凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性；当溶液A和D所有平行管均为阴性；C溶液中的最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度的0.25λ管均为阴性时，试验结果有效；按下式计算用细菌内毒素检查用水制成和供试液制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值溶液Cλc＝anti l g(∑X/2)溶液Bλc＝anti l g(∑X/4)式中溶液Cλc:C溶液反应终点浓度的几何平均值；溶液Bλc:B溶液反应终点浓度的几何平均值；X:反应终点浓度的对数值；当溶液A和D所有平行管均为阴性，0.5λ≤溶液Cλc≤2λ则结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求，试验有效，且0.5λ≤溶液Bλc≤2λ，认为供试品在该试验条件下不存在干扰作用；如溶液Bλc不在此规定范围内，则应放宽细菌内毒素限值并计算MVD，重新进行上述实验；d.日常检查将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成溶液A(S40)；用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，37±1℃试管恒温仪中，保温60±2分钟，将试管从恒温仪中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性；凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性。