[发明专利]一种高纯度隐地蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 201811593161.0 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN109666686A | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 刘胜;蒙亮;刘欣;李维;石聿勇;李威;胡艳红 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学鄂州工业技术研究院;华中科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;A01N37/46;A01P1/00;A01P3/00;A01P21/00 |
| 代理公司： | 北京众达德权知识产权代理有限公司 11570 | 代理人： | 刘杰 |
| 地址： | 436044 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高纯度隐地蛋白的制备方法，步骤包括：(1)将所述目的蛋白的编码基因与TEV蛋白酶、T4噬菌体Soc蛋白基因片段依次连接，制备融合重组蛋白编码基因；(2)将所述融合重组蛋白的编码基因转入质粒中；(3)将质粒转入大肠杆菌宿主中；(4)使用Soc蛋白缺失的Soc‑T4噬菌体感染所述的大肠杆菌宿主，培养宿主表达展示所述融合重组蛋白的T4噬菌体；(5)分离展示有融合重组蛋白的T4噬菌体；(6)从所述T4噬菌体中分离融合重组蛋白，TEV蛋白酶切后获得所述目的蛋白。该方法能够简便快速的获取高纯度的隐地蛋白，且所得的隐地蛋白溶液直接用作农用抗菌抑菌剂能够达到明显促进植物生长的效果，具备良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 重组蛋白 编码基因 融合 高纯度 制备 大肠杆菌宿主 蛋白 目的蛋白 质粒 转入 蛋白溶液 基因片段 抗菌抑菌 宿主表达 依次连接 展示 感染 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高纯度隐地蛋白的制备方法，步骤包括：S1、将隐地蛋白的编码基因与TEV蛋白酶、T4噬菌体Soc蛋白基因片段依次连接，制备Cryptogein‑TEV‑Soc融合重组蛋白编码基因，所述隐地蛋白的编码区在TEV‑Soc融合蛋白基因的上游；S2、将所述Cryptogein‑TEV‑Soc融合重组蛋白的编码基因转入质粒中；S3、将步骤S2所得质粒转入大肠杆菌宿主中；S4、使用Soc蛋白缺失的Soc‑T4噬菌体感染步骤S3所得的大肠杆菌宿主，培养宿主表达展示所述Cryptogein‑TEV‑Soc融合重组蛋白的T4噬菌体；S5、分离展示有所述Cryptogein‑TEV‑Soc融合重组蛋白的T4噬菌体；S6、从步骤S5所得T4噬菌体中分离所述Cryptogein‑TEV‑Soc融合重组蛋白，TEV蛋白酶切、离心得上清液即为隐地蛋白溶液。
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