[发明专利]鸭瘟病毒US1基因无痕缺失病毒株及其构建方法

摘要

本发明提供了一种鸭瘟病毒US1基因无痕缺失病毒株及其构建方法。本发明利用GS1783大肠杆菌菌株及pEPkan‑S质粒，在细菌人工染色体重组鸭瘟病毒拯救系统平台上经两次同源重组分别缺失鸭瘟病毒US1单、双拷贝基因，首次完成了该基因的无痕缺失病毒株构建，并探究了该基因对病毒复制的影响。本发明技术方案为准确探究鸭瘟病毒US1基因功能奠定了基础，以期对鸭瘟病毒分子生物学研究提供参考。

主权项

1.鸭瘟病毒US1基因无痕缺失病毒株CHv‑BAC‑G‑ΔUS1的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将pBAC‑DPV质粒转化到GS1783大肠杆菌感受态中，获得GS1783‑pBAC‑DPV菌株，然后制备GS1783‑pBAC‑DPV感受态；(2)以pEPkan‑S为模板，以1603F、1603R作为引物，通过PCR方法扩增包含I‑SceI酶切位点和Kana元件的碱基片段以及US1基因上、下游各40bp同源臂的打靶片段1603，切胶回收获得1603片段；(3)将1603片段转化到GS1783‑pBAC‑DPV感受态中，筛选、鉴定，获得阳性克隆子GS1783‑pBAC‑DPV‑ΔUS1‑Kana；(4)将阳性克隆子GS1783‑pBAC‑DPV‑ΔUS1‑Kana中的I_sceI‑Kana片段去掉，经抗生素筛选和PCR鉴定，获得阳性克隆子GS1783‑pBAC‑DPV‑ΔUS1；(5)从阳性克隆子GS1783‑pBAC‑DPV‑ΔUS1中提取pBAC‑DPV‑ΔUS1质粒，将pBAC‑DPV‑ΔUS1质粒转染DEF细胞，通过克隆筛选，获得US1基因无痕缺失病毒株CHv‑BAC‑G‑ΔUS1。