[发明专利]一种利用大肠杆菌制备生物活性猪瘟E2蛋白的方法与及其应用在审
| 申请号： | 201811601856.9 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109593700A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 张开岳;陶家权;单玉飞;李少辉;陶慧丽 | 申请（专利权）人： | 镇江瑞华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C07K14/18;C12N15/70;A61K39/187;A61P31/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 镇江基德专利代理事务所(普通合伙) 32306 | 代理人： | 邓月芳 |
| 地址： | 212000 江苏省镇江市新区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用大肠杆菌制备生物活性猪瘟E2蛋白的方法，包括以下步骤：1)分别克隆促溶标签GST基因、促溶标签SUMO基因、猪瘟E2基因；2)将步骤1)获得的3种基因连接，获得融合基因；3)将步骤2)获得的融合基因与大肠杆菌表达载体连接，得到含融合基因的重组表达载体；4)将步骤3)获得重组表达载体转化入大肠杆菌表达菌株感受态细胞中，获得包含融合基因的重组大肠杆菌表达菌株；5)将步骤4)获得的重组表达菌株进行培养，利用IPTG诱导融合蛋白表达；6)回收、蛋白酶水解并分离纯化猪瘟E2蛋白，应用本发明的制备的猪瘟E2蛋白亚单位疫苗，具有抗原纯度高、生物活性强，同时制备疫苗过程简单，生产成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 猪瘟E2蛋白 融合基因 重组表达载体 大肠杆菌 制备生物 制备 大肠杆菌表达菌株 标签 大肠杆菌表达 重组表达菌株 重组大肠杆菌 蛋白酶水解 感受态细胞 生产成本低 亚单位疫苗 表达菌株 分离纯化 基因连接 抗原纯度 融合蛋白 生物活性 载体连接 猪瘟 应用 克隆 疫苗 回收 转化 | ||
【主权项】：
1.一种利用大肠杆菌制备生物活性猪瘟E2蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)分别克隆促溶标签GST基因、促溶标签SUMO基因、猪瘟E2基因；2)将步骤1)获得的3种基因与大肠杆菌表达载体连接连接，得到含融合基因的重组表达载体；3)将步骤2)获得重组表达载体转化入大肠杆菌表达菌株感受态细胞中，获得包含融合基因的重组大肠杆菌表达菌株；4)将步骤3)获得的重组表达菌株进行培养，利用IPTG诱导融合蛋白表达；5)回收、蛋白酶水解并分离纯化猪瘟E2蛋白。
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