[发明专利]一种大肠菌群计数的检测方法

摘要

本发明公开了一种大肠菌群计数的检测方法，本发明操作简单，利用大肠菌群可以发酵乳糖，产酸、产气的原理，在发酵管内添加抑制革兰氏阳性菌的抑菌剂等，无需复发酵的确证实验，在24小时内确定大肠菌群的数量，检测精度高。

主权项

1.一种大肠菌群计数的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：A、样品的稀释：a、固体和半固体样品:称取10g样品,放入盛有90mL生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min‑10000r/min均质1min‑2min,或放入盛有90mL生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min‑2min,制成1∶10的样品匀液；b、液体样品:以无菌吸管吸取10mL样品置盛有90mL生理盐水的无菌锥形瓶，瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠；或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇,充分混匀,制成1∶10的样品匀液；c、样品匀液的pH在6.5‑7.5之间,必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节；d、用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL生理盐水的无菌试管中,振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1∶100的样品匀液；e、根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液，每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头，从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程小于15min；B、发酵试验：每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液,每个稀释度接种3管伊红美蓝煌绿胆盐乳糖发酵管,每管接种1mL,在35℃‑37℃温度下培养22h‑26h,观察试管内是否有沉淀生成，倒管内是否有气泡产生，未产气或未生成沉淀者为大肠菌群阴性，生成沉淀并产气者,计为大肠菌群阳性管；C、大肠菌群最可能数的报告：按步骤B检出的大肠菌群阳性管数,检索MPN表,报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。