[发明专利]一种靶向血液肿瘤的双嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞在审
| 申请号： | 201811626899.2 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN109929807A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 刘燕丽;张道强;刘传杰;王金环;徐矫健;葛淑娟;王玉娟 | 申请（专利权）人： | 青岛麦迪赛斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;A61P35/00 |
| 代理公司： | 济南方宇专利代理事务所(普通合伙) 37251 | 代理人： | 俞波 |
| 地址： | 266100 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明提供一种靶向血液肿瘤的双嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞，涉及生物技术领域。该靶向血液肿瘤的双嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞，其构建步骤为：采集50ml人外周血,使用淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞（PBMC）；在抗体和因子作用下，得到大量增殖性T细胞，提取PBMC中总RNA，逆转录为PCR反应的模板cDNA，将编码上述嵌合抗原的核苷酸片段插入pLVX‑IRES‑Neo载体中，获得重组嵌合抗原受体表达质粒。该靶向血液肿瘤的双嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞，通过设置嵌合抗原受体修饰的T细胞与Raji细胞效靶比为5:1，从而达到了使T细胞对Raji细胞的杀伤性最高的目的，通过使用双靶向CD19和CD22分子的嵌合抗原受体，从而解决了患者出现了肿瘤复发现象的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 嵌合抗原 修饰 血液肿瘤 靶向 淋巴细胞分离液 生物技术领域 受体表达质粒 重组嵌合抗原 单个核细胞 核苷酸片段 人外周血 因子作用 肿瘤复发 逆转录 效靶比 增殖性 总RNA 构建 抗体 双靶 采集 | ||
【主权项】：
1.一种靶向血液肿瘤的双嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞，其特征在于：包括以下步骤：1）人外周血PBMC的分离采集50ml人外周血,使用淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞（PBMC）；在抗体和因子作用下，得到大量增殖性T细胞，提取PBMC中总RNA，逆转录为PCR反应的模板cDNA。2）构建重组质粒将编码上述嵌合抗原的核苷酸片段插入pLVX‑IRES‑Neo载体中，获得重组嵌合抗原受体表达质粒，重组质粒测序。3）提取重组质粒将步骤2）所得的重组质粒使用去内毒素质粒提取试剂盒提取重组质粒，提取后进行酶切鉴定和送往公司测序再次进行验证。4）慢病毒制备和浓缩：将步骤3）提取的重组质粒和病毒包装质粒共转染293T细胞，取病毒上清浓缩并测定病毒滴度。5）双靶点修饰性T细胞的获得使用步骤4）制备的慢病毒感染T细胞，获得双靶标修饰性T细胞。
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