[发明专利]一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法

摘要

本发明提供了一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法。采用肌氨酸和肌氨酸氧化酶反应原位制备荧光功能铜纳米簇，利用是否产生荧光的结果检测待测物中是否含有肌氨酸(和/或肌氨酸氧化酶)，利用铜纳米簇的荧光强度可以定量检测肌氨酸(和/或肌氨酸氧化酶)的浓度，实现荧光铜纳米簇在荧光法检测肌氨酸和/或肌氨酸氧化酶中的应用。该方法避免了生物体其他氨基酸的干扰，可以选择性和无创地检测尿液、汗液、血液中肌氨酸的浓度；并利用荧光turn‑on的方法检测肌氨酸的浓度，避免了实验中的假信号可能带来的干扰；生成的铜纳米簇具有优良的荧光性质，在生物医学等领域具有重要的应用价值。

主权项

1.一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法，具体步骤如下：(1)取3500～4000μL不同浓度梯度的肌氨酸溶液(100～2000μM)，分别将其与100～500μL浓度为1mg/mL的肌氨酸氧化酶(SOx)共混；然后置于40～45℃水浴锅中温育2～3h；(2)在上述步骤(1)的各种浓度的溶液中，依次加入柠檬酸缓冲溶液(浓度为1mM,pH＝3.0)100～500μL,甲基丙烯酸100～400μL(浓度为40mM)，FeSO₄ 10～100μL(浓度为50mM)；震荡摇匀，室温下反应10～120min；之后用分子量为500～1500Da的透析袋透析12～24h；(3)取步骤(2)制得的溶液500μL，依次加入Cu(NO₃)₂ 100～500μL(100mM)，醋酸缓冲溶液50～100μL(pH＝4.0～5.0)，并震荡混合均匀；将样品置于波长为256nm的紫外光下辐照2～10分钟，得到铜纳米簇最终溶液；当最终溶液含有具有荧光强度的铜纳米簇时，所述待测样品中含有肌氨酸；当最终溶液不含有具有荧光强度的铜纳米簇时，所述待测样品中不含有肌氨酸；(4)重复步骤(1)～(3)，测量不同浓度下的肌氨酸，测试铜纳米簇最终溶液的荧光发射光谱；建立铜纳米簇最终溶液的荧光强度的数值与肌氨酸浓度的定量关系曲线，作为铜纳米簇的荧光强度与肌氨酸浓度的工作曲线；将肌氨酸溶液替换为待测样品后，按照步骤(1)～(3)进行，得到具有一定荧光强度的铜纳米簇的待测样品溶液，根据待测样品溶液中铜纳米簇的荧光强度，关联定量关系，可以计算得到待测样品中的肌氨酸浓度；同理，调换肌氨酸为肌氨酸酶并变化其浓度，可以检测是否含有肌氨酸酶以及检测肌氨酸酶的浓度。