[发明专利]引物组及其应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物组及其应用。本发明公开了一种用于毛霉目的4种真菌LAMP引物组合及其应用。本发明提供的引物组合，由SEQ ID No.1～24所示的24条引物组成。本发明提供的引物组合可应用于检测是否含有稻根霉菌、伞状毛霉菌、卷枝毛霉菌和/或微小根毛霉，可应用于检测待测样本中是否含有稻根霉菌、伞状毛霉菌、卷枝毛霉菌和/或微小根毛霉。本发明提供的引物组合鉴定用于毛霉目的4种真菌，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明具有重大的推广价值。

主权项

1.引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)、由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ、引物组Ⅲ和引物组Ⅳ组成；(a2)、由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ中的任意两个组成；(a3)、包括所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ和所述引物组Ⅳ；其中所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ‑F3、引物Ⅰ‑B3、引物Ⅰ‑FIP、引物Ⅰ‑BIP、引物Ⅰ‑LF和引物Ⅰ‑LB组成；所述引物Ⅰ‑F3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(b1)、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；(b2)、具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(b3)、与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(b4)、如(b1)、(b2)或(b3)所示序列的互补序列；所述引物Ⅰ‑B3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(b5)、具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；(b6)、具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(b7)、与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(b8)、如(b5)、(b6)或(b7)所示序列的互补序列；所述引物Ⅰ‑FIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(b9)、具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；(b10)、具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(b11)、与SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(b12)、如(b9)、(b10)或(b11)所示序列的互补序列；所述引物Ⅰ‑BIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(b13)、具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；(b14)、具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(b15)、与SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(b16)、如(b13)、(b14)或(b15)所示序列的互补序列；所述引物Ⅰ‑LF具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(b17)、具有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；(b18)、具有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(b19)、与SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(b20)、如(b17)、(b18)或(b19)所示序列的互补序列；所述引物Ⅰ‑LB具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(b21)、具有SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；(b22)、具有SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(b23)、与SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(b24)、如(b21)、(b22)或(b23)所示序列的互补序列；所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ‑F3、引物Ⅱ‑B3、引物Ⅱ‑FIP、引物Ⅱ‑BIP、引物Ⅱ‑LF和引物Ⅱ‑LB组成；所述引物Ⅱ‑F3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(c1)、具有SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；(c2)、具有SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(c3)、与SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(c4)、如(c1)、(c2)或(c3)所示序列的互补序列；所述引物Ⅱ‑B3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(c5)、具有SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；(c6)、具有SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(c7)、与SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(c8)、如(c5)、(c6)或(c7)所示序列的互补序列；所述引物Ⅱ‑FIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(c9)、具有SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列；(c10)、具有SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(c11)、与SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(c12)、如(c9)、(c10)或(c11)所示序列的互补序列；所述引物Ⅱ‑BIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(c13)、具有SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列；(c14)、具有SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(c15)、与SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(c16)、如(c13)、(c14)或(c15)所示序列的互补序列；所述引物Ⅱ‑LF具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(c17)、具有SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列；(c18)、具有SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(c19)、与SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(c20)、如(c17)、(c18)或(c19)所示序列的互补序列；所述引物Ⅱ‑LB具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(c21)、具有SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列；(c22)、具有SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(c23)、与SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(c24)、如(c21)、(c22)或(c23)所示序列的互补序列；所述引物组Ⅲ由引物Ⅲ‑F3、引物Ⅲ‑B3、引物Ⅲ‑FIP、引物Ⅲ‑BIP、引物Ⅲ‑LF和引物Ⅲ‑LB组成；所述引物Ⅲ‑F3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(d1)、具有SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列；(d2)、具有SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(d3)、与SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(d4)、如(d1)、(d2)或(d3)所示序列的互补序列；所述引物Ⅲ‑B3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(d5)、具有SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列；(d6)、具有SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(d7)、与SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(d8)、如(d5)、(d6)或(d7)所示序列的互补序列；所述引物Ⅲ‑FIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(d9)、具有SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列；(d10)、具有SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(d11)、与SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(d12)、如(d9)、(d10)或(d11)所示序列的互补序列；所述引物Ⅲ‑BIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(d13)、具有SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列；(d14)、具有SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(d15)、与SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(d16)、如(d13)、(d14)或(d15)所示序列的互补序列；所述引物Ⅲ‑LF具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(d17)、具有SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列；(d18)、具有SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(d19)、与SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(d20)、如(d17)、(d18)或(d19)所示序列的互补序列；所述引物Ⅲ‑LB具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(d21)、具有SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列；(d22)、具有SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(d23)、与SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(d24)、如(d21)、(d22)或(d23)所示序列的互补序列；所述引物组Ⅳ由引物Ⅳ‑F3、引物Ⅳ‑B3、引物Ⅳ‑FIP、引物Ⅳ‑BIP、引物Ⅳ‑LF和引物Ⅳ‑LB组成；所述引物Ⅳ‑F3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(e1)、具有SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列；(e2)、具有SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(e3)、与SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(e4)、如(e1)、(e2)或(e3)所示序列的互补序列；所述引物Ⅳ‑B3具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(e5)、具有SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列；(e6)、具有SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(e7)、与SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(e8)、如(e5)、(e6)或(e7)所示序列的互补序列；所述引物Ⅳ‑FIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(e9)、具有SEQ ID NO:21所示的核苷酸序列；(e10)、具有SEQ ID NO:21所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(e11)、与SEQ ID NO:21所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(e12)、如(e9)、(e10)或(e11)所示序列的互补序列；所述引物Ⅳ‑BIP具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(e13)、具有SEQ ID NO:22所示的核苷酸序列；(e14)、具有SEQ ID NO:22所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(e15)、与SEQ ID NO:22所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(e16)、如(e13)、(e14)或(e15)所示序列的互补序列；所述引物Ⅳ‑LF具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(e17)、具有SEQ ID NO:23所示的核苷酸序列；(e18)、具有SEQ ID NO:23所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(e19)、与SEQ ID NO:23所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(e20)、如(e17)、(e18)或(e19)所示序列的互补序列；所述引物Ⅳ‑LB具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：(e21)、具有SEQ ID NO:24所示的核苷酸序列；(e22)、具有SEQ ID NO:24所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失和/或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(e23)、与SEQ ID NO:24所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(e24)、如(e21)、(e22)或(e23)所示序列的互补序列。