[发明专利]一种多重PCR检测EB病毒的试剂盒、用于检测评估EB病毒活性的试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种多重PCR检测EB病毒的试剂盒、用于检测评估EB病毒活性的试剂盒及其制备方法。本发明通过两个特定的靶区域，设计特异性的引物和探针，实现对EBV‑DNA的准确检测；通过筛选特异性的抗体采用双抗体夹心的原理实现对EBNA‑1蛋白的准确检测。本发明将多重PCR检测EBV‑DNA及ELISA检测EBNA‑1蛋白联合使用，可以高效、特异的检测人血清中EBV在激活或潜伏感染状态下的病毒促癌活性，克服了现有试剂盒不能检测处于潜伏感染状态下的EBV病毒促癌活性，有利于EBV相关性肿瘤的疗效预测和预后判定。

主权项

1.一种多重PCR检测EB病毒的试剂盒，其特征在于，包括第一引物对、第一探针、第二引物对、第二探针、内参引物对和内参探针；第一探针、第二探针和内参探针的5’端分别标记不同的荧光基团；其中第一引物对的序列为：上游引物：5’‑GGTGGCCCTGGGGTAAGTCTG‑3’，如SEQ ID NO.1所示；下游引物：5’‑GGGGGCCTGTGGTGGTGAG‑3’，如SEQ ID NO.2所示；第一探针的序列为：5’‑CCCTGAAGATGCCGGACCCTGCCTGGAGAC‑3’，如SEQ ID NO.3所示；第二引物对的序列为：上游引物EBF‑4：5’‑CTAGCGACTCTGCTGGAAAT‑3’，如SEQ ID NO.4所示；下游引物EBR‑5：5’‑GAGTGTGTGCCAGTTAAGGT‑3’，如SEQ ID NO.5所示；第二探针序列为：5’‑GGGTCGTCATCATCTCCACCGGAACCAGAAG‑3’，如SEQ ID NO.6所示。