[发明专利]检测转基因成分DNA的方法及其使用的电化学传感器

摘要

一种检测转基因成分DNA的方法及其使用的电化学传感器，该传感机制是基于Fe3O4‑Au@Ag催化的H2O2还原电流的变化，由于形成夹心型DNA复合物，Fe3O4‑Au@Ag修饰的第三条DNA链与目标DNA杂交后被定量引入到电极表面上且与目标DNA的浓度相关。电化学信号主要来源于Fe3O4‑Au@Ag对H2O2的催化作用，应用DPV响应记录电化学信号，其随目标DNA浓度的增加信号增大。在最佳条件下，制备的生物传感器在DNA检测中具有1.0×10‑17至1.0×10‑10M宽线性范围和2.43×10‑18M的低检测限。该方法在对于DNA的检测中显示出了良好的特异性，且具有极高的灵敏度，稳定性好，操作简单方便且成本极低。

主权项

1.一种电化学传感器，其特征在于：包括三电极体系和检测池，该三电极体系包括工作电极、Ag/AgCl参比电极和铂丝对电极，所述工作电极为修饰的玻碳电极，该玻碳电极的修饰方法包括下列步骤：第一步：将多壁碳纳米管复合物修饰到预处理后的玻碳电极表面，干燥后电沉积金纳米粒子，蒸馏水洗涤后得到AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第二步：将捕获DNA溶液修饰到所述AuNPs/MWCNTs/GCE电极表面，在3～5℃条件下自组装过夜，然后用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，以除去未结合的捕获DNA，即得到pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第三步：将pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极在35～39℃下用牛血清白蛋白溶液封闭25～35min，得到BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；第四步：将第三步得到的BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极浸入不同浓度的目标DNA溶液，35～38℃温育0.8～1.2h，然后用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，随后再将电极浸入Fe3O4‑Au@Ag‑sDNA溶液，35～38℃温育0.8～1.2h，用0.1M的PB缓冲溶液淋洗，得到不同浓度的目标DNA修饰的Fe3O4‑Au@Ag‑sDNA/tDNA/BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极；所述检测池内容纳有电活性指示剂与缓冲液组成的检测底液，所述电活性指示剂为20mM的过氧化氢溶液，所述缓冲液为pH 7.4的0.1M磷酸盐缓冲溶液；在检测过程中，始终保持检测池中通入氮气；不同浓度的目标DNA修饰的Fe3O4‑Au@Ag‑sDNA/tDNA/BSA/pDNA/AuNPs/MWCNTs/GCE电极作为工作电极、Ag/AgCl参比电极和铂丝对电极构成三电极体系插入检测池的检测底液中，即为电化学传感器；用0.1M的TE缓冲溶液将硫醇修饰的捕获DNA和信号DNA分别配制成浓度为1μM的pDNA溶液和sDNA溶液，用0.1M的TE缓冲溶液将捕获DNA和信号DNA的互补序列配制不同浓度的目标DNA溶液。