[发明专利]链特异性检测亚硫酸氢盐转化的双链体在审
| 申请号： | 201880020810.X | 申请日： | 2018-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN110582580A | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | B·沃格斯廷;K·W·金咨勒;N·帕帕多普罗司;A·马托司;S·耶纳斯布拉马聂;W·G·尼尔森 | 申请（专利权）人： | 约翰斯霍普金斯大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 31100 上海专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 杨昀 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | BiSeqS(亚硫酸氢盐测序系统)是可以将测序特异性提高至少超过分子条码所实现特异性的至少两个数量级并且可以应用于任何大规模平行测序仪器的技术。BiSeqS采用亚硫酸氢盐处理以区分分子条码化DNA的两条链。其特异性源于对于两条链中待鉴定的相同突变的要求。因为不需要文库制备，所以该技术允许非常高效地使用模板DNA以及序列读数，其几乎全部局限于感兴趣的扩增子。这种高效对于临床样品如血浆而言至关重要，从中通常只能获得微量的DNA。BiSeqS可用于评估颠换，以及小插入或缺失，并可以可靠地检测>10,000个野生型分子中的一个突变。 | ||
| 搜索关键词： | 分子条码 条链 突变 亚硫酸氢盐测序 亚硫酸氢盐处理 个数量级 临床样品 平行测序 模板DNA 扩增子 野生型 测序 颠换 可用 血浆 文库 制备 局限 检测 评估 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于检测DNA分子群中罕见突变的方法，其包括：/n用亚硫酸氢盐处理DNA分子群以将DNA分子中的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶碱基，形成转化的DNA分子群；/n使用与分子条码连接的过量靶特异性扩增引物，将分子条码连接到所述转化的DNA分子群的两条链上，形成扩增的条码化经转化DNA分子群；/n将所述扩增的条码化经转化DNA分子在扩增反应中扩增，以形成扩增的条码化经转化DNA分子家族，其中共有相同分子条码的扩增的条码化经转化DNA分子形成DNA分子家族；/n对所述家族的多个成员进行测序反应，以获得所述家族的所述多个成员两条链的核苷酸序列；/n比较家族的多个成员的核苷酸序列，并鉴定其中>90％的成员含有所选突变的家族；和/n比较扩增的条码化经转化DNA分子两条互补链的核苷酸序列，并在两条互补链中鉴定所选突变。/n
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