[发明专利]用于改进编索引的核酸文库中的样品鉴定的组合物和方法在审
| 申请号： | 201880040485.3 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN110770353A | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | E·H·弗马斯;马哈迪耶·霍斯鲁海达里;克莱尔·贝维斯-莫特 | 申请（专利权）人： | 伊鲁米那股份有限公司;伊鲁米纳剑桥有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6855 |
| 代理公司： | 11262 北京安信方达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王玮玮;郑霞 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明涉及组合物和方法，所述组合物和方法用于通过在扩增和测序之前，用任选的外切核酸酶处理修饰或封闭从多个样品汇集的编索引(indexed)的多核苷酸的5’末端和3’末端来提高用于多重下一代测序的编索引的核酸文库制备物中的正确样品鉴定率。 | ||
| 搜索关键词： | 测序 索引 外切核酸酶 多核苷酸 核酸文库 样品鉴定 制备物 扩增 修饰 封闭 | ||
【主权项】：
1.一种方法，所述方法包括：/n提供第一文库，所述第一文库包含具有第一衔接子-靶-第一衔接子序列的第一多于一个多核苷酸，其中所述第一多于一个多核苷酸的多核苷酸在包含所述靶和在所述靶的两个末端的所述第一衔接子的至少一部分的区域是双链的；/n提供第一引物寡核苷酸，所述第一引物寡核苷酸被配置为在所述第一衔接子的链的3’末端附近与所述第一衔接子的一部分杂交，其中所述第一引物寡核苷酸的5’末端被修饰以防止被具有5’外切核酸酶活性的酶消化；/n提供第二引物寡核苷酸，所述第二引物寡核苷酸被配置为在所述第一衔接子的互补链的3’末端附近与所述第一衔接子的一部分的所述互补序列杂交，其中所述第二引物寡核苷酸的5’末端被修饰以防止被具有5’外切核酸酶活性的酶消化；/n将所述第一文库与所述第一引物寡核苷酸和所述第二引物寡核苷酸在适于扩增所述具有第一衔接子-靶-第一衔接子序列的多核苷酸的条件下在溶液中孵育，以产生具有被修饰以防止被具有5’外切核酸酶活性的酶消化的5’末端的扩增的第一文库多核苷酸，其中扩增的多核苷酸具有扩增的第一衔接子-靶-扩增的第一衔接子序列，并且其中所述扩增的第一衔接子序列包含第一文库特异性序列；/n修饰所述扩增的第一文库多核苷酸的3’末端，以防止(i)或(ii)的一种或两种：(i)被具有3’外切核酸酶活性的酶消化，或(ii)被具有聚合酶活性的酶将核苷酸添加到所述3’末端，从而产生具有修饰的5’末端和3’末端的受保护的第一文库多核苷酸。/n
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