[发明专利]一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法

摘要

本发明公开了一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，通过制备降解菌株和微囊藻毒素‑LR(Microcystin‑LR，MC‑LR)的共存液，构建与MC‑LR在真实水环境中存在形式接近的染毒样品；然后对人肝癌细胞进行染毒，利用MTT检测细胞代谢活性的方法，验证降解菌株共存条件下MC‑LR的毒性。本发明模拟了MC‑LR在湖泊等真实水环境中与降解菌株共存时的状态，弥补了对单一MC‑LR毒性研究的局限性，能够更好的对MC‑LR的毒性进行评估，在水产养殖业、环境治理等行业的应用前景较好；本发明对各类微囊藻毒素异构体具有普遍的适用性，应用范围广；本发明通过N+离子束注入技术对降解菌株进行辐照，得到辐照后降解菌株；并与辐照前降解菌株比较对MC‑LR的降解效果的强弱，进而验证了该方法的可行性。

主权项

1.一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将降解菌株制备成菌体细胞悬液，并稀释为10⁹个/mL；再制备降解菌株和MC‑LR共存的储备液；(2)分别配置浓度为1μM和0.1μM的MC‑LR和菌株共存工作液、1μM和0.1μM的纯MC‑LR工作液、降解菌株过滤后工作液；(3)取处于对数生长期的Hep G2细胞接种在经过宽离子束辐照改性后的96孔板中，每板接种18个孔，一组实验用一个板，总共接种2个板；在染毒一天的实验中，每孔接种8万细胞；在染毒三天的实验中，每孔接种4万细胞；分别培养24h；(4)细胞染毒：24h后，用步骤(2)配制的各浓度的MC‑LR和菌株共存工作液，以及步骤(2)配置的各浓度的纯MC‑LR工作液对Hep G2细胞进行染毒，并设置降解菌株过滤后工作液处理组和对照组；(5)进行MTT实验：将每孔接种8×10⁴个细胞的96孔板染毒一天后进行MTT实验，将每孔接种4×10⁴个细胞的96孔板染毒三天后进行MTT实验，然后检测其吸光值。