[发明专利]一种PAM-SA固定化微生物降解含油废水的方法

摘要

一种PAM‑SA固定化微生物降解含油废水的方法，首先进行高效降解含油废水的微生物菌剂的制备：该菌剂从长期受石油污染的土壤中筛选，以原油为唯一碳源，通过筛选富集分离法，最终分离筛选出具有高效石油降解能力的四株菌SEQ1‑BS、SEQ2‑AFS、SEQ3‑PSS和SEQ4‑AS；将四株微生物菌株先进行复活，再扩大培养，发酵生产，备用；固定化微生物：以聚丙烯酰胺—海藻酸钠为载体，建立包埋固定化微生物，用生理盐水洗净，备用；每周检测石油烃降解率、原油各组分及微生物数量，同时通过电镜观察固定化微生物小球的结构，直至含油废水的石油烃含量达标。

主权项

1.一种PAM‑SA固定化微生物降解含油废水的方法 ，其特征在于，其步骤为：（1）首先进行高效降解含油废水的微生物菌剂的制备：该菌剂从长期受石油污染的土壤中筛选，以原油为唯一碳源，通过筛选富集分离法，最终分离筛选出具有高效石油降解能力的四株菌SEQ1‑BS、SEQ2‑AFS、SEQ3‑PSS和SEQ4‑AS；（2）将四株微生物菌株先进行复活，再扩大培养，发酵生产，备用；分离得到的4株优势菌种分别为BS、AFS、PSS和AS；其中SEQ1‑BS属于芽孢杆菌属，Bacillusencimensis strain encimensis、SEQ2‑AFS 属于粪产碱杆菌，Alcaligenes faecalis strain，SEQ3‑PSS属于西图则氏假单胞菌，Pseudomonas stutzeri strain，SEQ4‑AS属于不动杆菌属，Acinetobacter sp，将4株菌在无菌条件下分别接种至营养肉汤培养基中，在37℃恒温培养箱中培养1天，然后按体积比1：1：1：1的比例制成一份混合菌悬液，放入37℃、150 r/ min的摇床中培养2～3 d，经平板稀释法检查菌落数≥10⁷个/ml，即可取出放置于4℃冰箱内备用；（3）固定化微生物：以聚丙烯酰胺—海藻酸钠为载体，建立包埋固定化微生物的步骤如下：a．将聚丙烯酰胺—海藻酸钠加热溶于水；b．将该溶液与SEQ1、SEQ2、SEQ3、SEQ4微生物菌株制作的菌悬液混合均匀，使其菌落数≥10⁸个/ml；c．将聚丙烯酰胺—海藻酸钠与菌体混合液用针形管滴入5%‑10%的CaCl₂溶液中，固定7‑8h；d．滤出颗粒，用生理盐水洗净，备用；（4）每周检测石油烃降解率、原油各组分及微生物数量，同时通过电镜观察固定化微生物小球的结构，直至含油废水的石油烃含量达标。