[发明专利]大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体在审
| 申请号： | 201910015538.2 | 申请日： | 2019-01-08 |
| 公开（公告）号： | CN109628392A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 段莉;王大平;梁宇杰;徐晓;李兴福;欧阳侃 | 申请（专利权）人： | 深圳市第二人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 马金华 |
| 地址： | 518000 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，公开了大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，该方法包括以下步骤：S1：获取细胞沉淀，首先抽取病人膝关节积液，离心获得细胞沉淀，留取备用；S2：培养间充质干细胞，在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养，留取备用；S3：生物反应器的预处理；S4：接种培养间充质干细胞；S5：培养获得外泌体。该发明所制备的外泌体具有较好的稳定性、生物相容性、生物稳定性，且制作步骤简单，降低了相应的生产成本，可大规模进行生产，直接提取细胞沉淀中的间充质干细胞，然后进行培养，培养完成后将上清液高速离心后即可获得所需的外泌体，适合推广。 | ||
| 搜索关键词： | 间充质干细胞 细胞沉淀 备用 预处理 生物技术领域 无血清培养基 病人膝关节 生物反应器 生物稳定性 生物相容性 高速离心 接种培养 直接提取 人关节 上清液 积液 制备 生产成本 抽取 制作 生产 | ||
【主权项】：
1.大规模生产符合GMP规范的临床级外泌体，其特征在于：该方法包括以下步骤：S1：获取细胞沉淀，首先抽取病人膝关节积液，离心获得细胞沉淀，留取备用；S2：培养间充质干细胞，在符合GMP的要求下利用无血清培养基对人关节来源的间充质干细胞进行培养，留取备用；S3：生物反应器的预处理，将生物反应器清洗干净，然后风干，留取备用；S4：接种培养间充质干细胞，将人关节液来源的间充质干细胞接种到微载体上，进行三维(3D)细胞培养，生物反应器的外部培养瓶不间断地提供细胞养分，细胞通过分子量截留膜和微载体保留于细胞生物反应室中；S5：培养获得外泌体，对S4中得到的上清液进行差异超速离心分离获取外泌体，并进行洗涤步骤从培养上清液中富集纯净的外泌体。
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