[发明专利]一种宫颈癌肿瘤原代细胞分离及培养方法

摘要

本发明公开了一种宫颈癌肿瘤原代细胞分离及培养方法，包括以下步骤：1）组织块放入预冷无菌的培养液中处理；2）组织清理并切碎组织；3）消化处理；4）无菌细胞滤器过滤，得到消化过滤液并低温放置；5）用胶原酶冲洗无菌细胞滤器，搜集入离心管；6）将离心管平放于震荡箱内充分震荡；7）合并4）和6）步消化液，离心，弃上清液；8）充分吹打重悬细胞沉淀；9）分离传代；10）磁珠分选。本发明的有益效果：能够延长组织离体时间，提高细胞生长效率，缩短时间周期，纯化效率高，为宫颈癌基础研究提供新型高效方案。

主权项

1.一种宫颈癌肿瘤原代细胞分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将切除后的组织块放入预冷培养液中，并低温放置；2）在超净台内对组织进行清理，清理后的组织块放入加有培养液的培养皿中，将组织切碎为1mm×1mm×1mm的碎块，得到碎块组织；3）向步骤2）中所述碎块组织中加入消化液，放置培养箱内进行消化处理，得到含细胞悬液的消化液；4）将步骤3）中所述含细胞悬液的消化液用100um无菌细胞滤器过滤至装有胎牛血清的试管内，冲洗得到含胎牛血清的消化过滤液，并低温放置；5）将步骤4）中所述100um无菌细胞滤器倒扣在培养皿上，用0.2%I型胶原酶将所述100um无菌细胞滤器的滤网冲洗干净，将冲洗液转移到离心管；6）将步骤5）中所述离心管平放于震荡箱内充分震荡，得到组织碎片消化液；7）将步骤4）中所述含胎牛血清的消化过滤液加入至步骤6）中所述组织碎片消化液中，离心，并弃去上清液，得到细胞沉淀；8）用培养液充分吹打重悬细胞沉淀，将获得的细胞移至培养箱中培养；9）分离传代；10）磁珠分选。