[发明专利]一种定点突变MSTN并同时定点整合PPARγ的载体有效
| 申请号： | 201910023959.X | 申请日： | 2019-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN109679998B | 公开（公告）日： | 2020-04-28 |
| 发明（设计）人： | 权富生;葛陆星;张涌;杨佳姝;康健;董翔宸;谢晓刚;王勇胜 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/10;C12N15/12;C12N5/10;C12N15/873 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 定点 突变 mstn 同时 整合 ppar 载体 | ||
【主权项】：
1.一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体，其特征在于，包括Cas9切割表达载体和打靶载体；所述Cas9切割表达载体包括Cas9蛋白表达框和sgRNA表达框，sgRNA靶位点在牛基因组2号染色体MSTN基因的3’UTR区；所述打靶载体上克隆有重组基因MRF‑PPARγ‑PloyA，并克隆有sgRNA靶位点的上游同源序列作为其5’同源臂，和下游同源序列作为其3’同源臂，其中5’同源臂引入g+6354G‑A单碱基突变；所述重组基因MRF‑PPARγ‑PloyA在PPARγ基因CDS区的上游连接牛骨骼肌特异性启动子MRF，在下游连接PloyA。
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