[发明专利]一种分离提纯甘木通有效成分的方法

摘要

本发明公开了一种分离提纯甘木通有效成分的方法，包括以下步骤：（1）使用乙醇对甘木通的地上部分进行提取；（2）上正相硅胶色谱柱，进行梯度洗脱；（3）将提取物A2上正相硅胶柱色谱，进行梯度洗脱，收集洗脱液上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，进行洗脱；（4）将提取物A3上正相硅胶色谱柱，洗脱，蒸发浓缩；（5）将提取物A5上正相硅胶色谱柱，进行洗脱并浓缩；（6）将提取物A6浓缩后，加入正丁醇进行多次萃取，合并正丁醇相并浓缩后上反相硅胶色谱柱，使用甲醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩并干燥后得到提取物。该方法可以将甘木通中的活性物质逐一单独提纯出来，且提纯后的物质纯度高。

主权项

1.一种分离提纯甘木通有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）使用乙醇对甘木通的地上部分进行提取，获得乙醇提取物；（2）将所述乙醇提取物上正相硅胶色谱柱，依次使用体积比为11:1～9:1、8:1～6:1、4:1～2:1、1.5:1～0.5:1的石油醚/丙酮混合溶剂、丙酮以及甲醇进行梯度洗脱，并分别收集洗脱液并除去溶剂，得到提取物A1、A2、A3、A4、A5、A6；（3）将提取物A2上正相硅胶柱色谱，依次使用体积比为100:1～80:1和60:1～40:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，收集60:1～40:1的氯仿/甲醇的洗脱液并蒸发溶剂浓缩后，上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂洗脱，静置洗脱液析出粉末状沉淀，过滤分离，干燥后得到鼠尾草素；（4）将提取物A3上正相硅胶色谱柱，使用体积比为40:1～20:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，先后分两批次收集得到洗脱液t1和t2，蒸发溶剂浓缩后得到提取物F1和提取物F2；（4a）将提取物F1上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，静置洗脱液析出粉末状沉淀，过滤分离得到齐墩果酸；（4b）将提取物F2上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，通过HPLC制备色谱法进行处理，分别得到提纯液t3和t4，除去溶剂并干燥后分别得到落叶松树脂醇和二氢脱氢二松柏醇；（5）将提取物A5上正相硅胶色谱柱，用体积比为25:1～5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，先后分两批次收集得到洗脱液t5和t6，浓缩后得到提取物F3和F4；（5a）将提取物F3上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，静置洗脱液析出粉末状沉淀，固液分离，用有机溶剂将粉末状沉淀溶解后，上MCI GEL CHP20/P120柱，用60～80%甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，重结晶并干燥后得到芹菜素；（5b）将提取物F4上MCI GEL CHP20/P120柱，用70～90%甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，重结晶并干燥后得到木犀草素；（6）将提取物A6浓缩后，加水溶解，然后加入与加水后液体总体积等体积的正丁醇进行多次萃取，合并正丁醇相并浓缩后上反相硅胶色谱柱，依次使用10～20%、20～35%和35～50%的甲醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩并干燥后得到提取物F5、F6和F7；（6a）将提取物F5进行浓缩后上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液并浓缩后上正相硅胶色谱柱，使用体积比为9:1～7:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩并干燥后，得到咖啡酸；（6b）将提取物F6进行浓缩后上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液并浓缩后上正相硅胶色谱柱，使用体积比为7:1～5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩并干燥后，得到Urolignoside；（6c）将提取物F7进行浓缩后上葡聚糖凝胶色谱柱Sephadex LH‑20，用体积比为2:1～0.5:1的氯仿/甲醇混合溶剂进行洗脱，先后分两批次收集洗脱液t7和t8，浓缩干燥后分别得到紫云英苷和蒙花苷。