[发明专利]一种评价β-胡萝卜素乳液体系对β-胡萝卜素保护效果的方法

摘要

本发明公开了一种评价β‑胡萝卜素乳液体系对β‑胡萝卜素保护效果的方法，包括如下步骤：S1、将样品乳液分为体系均匀的两部分；S2、取部分一乳液进行等温储藏实验，温度为37℃和50℃，避光储藏，取储藏时间为0天、1天、4天、7天和14天的样品测定β‑胡萝卜素含量，计算其保留率；S3、取部分二乳液进行体外模拟消化，包括口相、胃相和小肠相，并检测原液以及口相、胃相、小肠相消化液的β‑胡萝卜素含量，计算各相的β‑胡萝卜素保留率，并对小肠相消化液进行离心，测定其生物利用率。本发明利用体外模拟消化模型结合光学手段对β‑胡萝卜素乳液体系对β‑胡萝卜素保护效果进行评价，结果直观可靠，具有较大的应用价值。

主权项

1.一种评价β‑胡萝卜素乳液体系对β‑胡萝卜素保护效果的方法，其特征在于，包括步骤：S1、将待测β‑胡萝卜乳液体系分为体系均匀的两部分，部分一乳液进行37℃和50℃等温储藏，部分二乳液进行体外模拟消化；以吐温20制得的吐温乳液作为对照，分别进行37℃和50℃等温储藏、体外模拟消化；其中，所述吐温乳液的具体制备方法为：取100～500μL吐温20，分散于50～60mL 10mM pH8的磷酸盐缓冲液中得到水相，将β‑胡萝卜素加入玉米油中，在10～30kHz、50～55℃条件下超声加热10～20min，配制成β‑胡萝卜素质量浓度为0.05％～0.1％的油相，将油相与水相按重量比(2～5):100的比例混合，10000～15000r/min分散2～3min，然后经10000～12000psi均质3～7次，得吐温乳液；S2、等温储藏：取5～10mL部分一乳液分别在37℃和50℃避光储藏，取储藏时间为0天、1天、4天、7天和14天的样品测定β‑胡萝卜素含量，计算其保留率，计算公式为：C_t×100％/C₀，其中C_t为样品中β‑胡萝卜素含量，C₀为储藏第0天的样品中β‑胡萝卜素含量；S3、体外模拟消化，包括步骤：S31、原液制备：取部分二乳液，用10mM pH8的磷酸盐缓冲液对其进行稀释，通过计算将已知油相比例的乳液稀释到油相比例为2％，记为原液；测定所述原液β‑胡萝卜素含量，记为C_原液；S32、模拟口相消化：取20mL部分二乳液，与20mL模拟唾液混合，调整pH6.8，温度37℃，避光震荡2～10min，得口相消化液；震荡结束后取样测定β‑胡萝卜素含量1，计算β‑胡萝卜素保留率，公式为：C_t1×100％/C_原液，其中C_t1为β‑胡萝卜素含量1；S33、模拟胃相消化：将2g氯化钠与7毫升盐酸用去离子水定容至1L作为模拟胃液；取20mL模拟胃液加入终浓度2000U/mL的胃蛋白酶，放置30min，加入20mL步骤S32所得口相消化液，调整pH2.5，避光震荡，震荡结束后得胃相消化液，取样测定β‑胡萝卜素含量2，计算β‑胡萝卜素保留率，公式为：C_t2×100％/C_原液，其中C_t2为β‑胡萝卜素含量2；S34、模拟小肠相消化：取30g步骤S33所得胃相消化液在37℃恒温环境中调整pH7，与1.5mL模拟小肠液混合后加入3.5mL 53.6mg/mL胆汁盐溶液，再次调整pH为7后加入终浓度为100U/mL的脂肪酶，加入酶后混合液的pH开始降低，此时开始计时并用浓度为0.1～1M的氢氧化钠溶液滴定，保持混合液的pH恒定为7，2h后结束反应，得到小肠相消化液；其中，所述模拟小肠液具体为：用去离子水配制的氯化钙终浓度为0.25mol/L、氯化钠终浓度为3.75mol/L的混合水溶液；S35、取步骤S34所得小肠相消化液1～5mL测定β‑胡萝卜素含量3，记为C_小肠相，取步骤S34剩余小肠相消化液进行离心，测定离心后上清液的β‑胡萝卜素含量记为C_离心后，计算β‑胡萝卜素保留率和生物利用率，β‑胡萝卜素保留率计算公式为：C_离心后×100％/C_原液；生物利用率计算公式为：C_离心后×100％/C_小肠相。其中，所述测定β‑胡萝卜素含量具体为：取200μL待测样品与2.5mL乙醇/正己烷混合液(2:3v_乙醇/v_正己烷)震荡混匀，时间为10～20s，随后将混合液静置，待分层后取上层正己烷层转移至10mL棕色容量瓶中，向剩余的下层乙醇层中加入1.5mL正己烷，震荡混匀，时间为10～20s，将混合液静置，待分层后取上层正己烷层转移至10mL棕色容量瓶中；再次向剩余的下层乙醇层中加入1.5mL正己烷，震荡混匀，时间为10～20s，将混合液静置，待分层后取上层正己烷层转移至10mL棕色容量瓶中；第三次向剩余的下层乙醇层中加入1.5mL正己烷，震荡混匀，时间为10～20s，将混合液静置，待分层后取上层正己烷层转移至10mL棕色容量瓶中，最后将上述收集的正己烷层溶液用正己烷定容至10mL，测定其在450nm下的吸光度，根据标准曲线计算β‑胡萝卜素含量；其中，所述β‑胡萝卜素标准曲线的制作方法具体为：配置浓度范围从0.1～100μg/mL的系列β‑胡萝卜素标准溶液，测定各浓度溶液在450nm下的吸光度，根据β‑胡萝卜素标准溶液的浓度及吸光度绘制标准曲线。