[发明专利]标准质粒及制备方法、使用该质粒检测重组EV71疫苗外源基因拷贝数的方法及方法的应用

摘要

本发明属于肠道病毒71型的制备技术领域，特别涉及标准质粒及制备方法、使用该质粒检测重组EV71疫苗外源基因拷贝数的方法及应用。本发明的标准质粒主要由内源基因MOX、外源基因P1和外源基因3CD经PCR扩增后连接于克隆载体中而构建而成，便于绘制出对应的标准曲线，以供重组EV71疫苗外源基因的拷贝数采用Taqman探针‑荧光定量PCR的方法进行测定，能够简便快速、绝对定量、准确地对插入外源基因拷贝数进行分析，从而有效缩短了重组EV71疫苗外源基因拷贝数测定的检测时间，便于多次重复操作。

主权项

1.一种标准质粒，其特征在于，主要由内源基因MOX、外源基因P1和外源基因3CD经PCR扩增后连接于克隆载体中而构建而成，其涉及的引物对如下：引物对1，MOX‑F1：AATGAATTCTTCCTGTTGTGGACGACCTMOX‑R1：GATTGGCACCACCAGTGCTTGTTTCTCATA引物对2，EV71‑P1‑F1：TGAGAAACAAGCACTGGTGGTGCCAATCTCEV71‑P1‑R1：AACTTCTCGTTGGGGTTGGGTGGAAGTTTG引物对3，EV71‑3CD‑F1：TCCACCCAACCCCAACGAGAAGTTCAGAGAEV71‑3CD‑R1：AATGTCGACCTTACCAGACAGGTTCAGG。