[发明专利]一种检测重组CVA16疫苗外源基因拷贝数的标准质粒、检测方法及其应用

摘要

本发明属于柯萨奇病毒A16型的制备技术领域，特别涉及标准质粒及制备方法、使用该质粒检测重组CVA16疫苗外源基因拷贝数的方法及应用。本发明的标准质粒主要由内源基因MOX、外源基因P1和外源基因3CD经PCR扩增后连接于克隆载体中而构建而成，便于绘制出对应的标准曲线，以供重组CVA16疫苗外源基因的拷贝数采用Taqman探针‑荧光定量PCR的方法进行测定，能够简便快速、绝对定量、准确地对插入外源基因拷贝数进行分析，从而有效缩短了重组CVA16疫苗外源基因拷贝数测定的检测时间，便于多次重复操作。

主权项

1.一种标准质粒，其特征在于，主要由内源基因MOX、外源基因P1和外源基因3CD经PCR扩增后连接于克隆载体中而构建而成，其涉及的引物对如下：引物对1，MOX‑F1：CCGGAATTCTTCCTGTTGTGGACGACCTMOX‑R1：CGATTGGCACCACGTTGCTTGTTTCTCATA引物对2，CVA16‑P1‑F1：TATGAGAAACAAGCAACGTGGTGCCAATCGCVA16‑P1‑R1：GAACACAGATGGCTCTTCACGGTCTGGTCG引物对3，CVA16‑3CD‑F1：CGACCAGACCGTGAAGAGCCATCTGTGTTCCVA16‑3CD‑R1：GCGTCGACGGGTCACGTACTCGTCTGG。