[发明专利]一种高灵敏的磁珠分选联合胶体金标记的外泌体免疫电镜方法有效
| 申请号： | 201910032544.9 | 申请日： | 2019-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN109738630B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 董强;崔梅;国敏;陈兴栋;赵鸿琛;丁梦媛 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | G01N33/532 | 分类号： | G01N33/532;G01N33/543;G01N33/558 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 张莹;高丽娜 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种高灵敏的磁珠分选联合胶体金标记的外泌体免疫电镜方法，具体包括以下步骤：(1)制备生物素化的抗体；(2)纯化目标亚型外泌体；(3)免疫标记。与现有技术相比，本发明克服了目前免疫电镜技术检测外泌体时纯度低、效率低的弊端，保留了其分辨率高的优势，适合检测位于生物医学标本来源外泌体的微量抗原的检测，阳性信号得率高，便于判断。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 灵敏 分选 联合 胶体 标记 外泌体 免疫 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高灵敏的磁珠分选联合胶体金标记的外泌体免疫电镜方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备生物素化的一抗：用碱性缓冲溶液将生物素化的蛋白质稀释并充分透析，得到蛋白质溶液，向蛋白质溶液中加入N‑羟基琥珀酰亚胺生物素的二甲亚砜溶液，搅拌，然后加入NH4Cl溶液，搅拌、透析、洗脱后收集得到的生物素化的一抗样品；(2)纯化目标亚型外泌体：将生物样本离心分离，加入步骤(1)得到的生物素化的一抗孵育，然后与亲水性链霉素亲和磁珠混合孵育，磁分离，洗涤后再加入解离液孵育，磁分离后收集上清液，即得到纯化的目标亚型外泌体；(3)免疫标记：将步骤(2)中得到的外泌体重悬，然后将外泌体滴于parafilm膜上，将铜网置于液滴上漂浮，然后将铜网转移至PBS和NH4Cl液滴中处理，然后转移至一抗孵育、洗涤，然后转移至胶体金二抗，洗涤，用磷钨酸复染，干燥后，得到待检测的标记外泌体。
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